Полуколичественное определение мельдония и эмоксипина в моче методом ВЭЖХ–МС/МС после приема однократной терапевтической дозы препарата Брейнмакс® и молока коров, получавших профилактический курс Эмидонола

Цели. Эмидонол® — лекарственный препарат ветеринарного назначения, применяемый для лечения у крупного рогатого скота патологических состояний, связанных с гипоксией. Продуктом биотрансформации Эмидонола® в организме животных помимо мельдония, входящего в Запрещенный список Всемирного антидопингового агентства, является антиоксидант и антигипоксант эмоксипин, который может выступать в качестве маркера контаминации продуктов питания вышеуказанным получившим широкую известность модулятором метаболизма. Цель исследования заключалась в полуколичественном определении эмоксипина и мельдония и сравнении профилей выведения этих веществ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии–тандемной масс-спектрометрии (ВЭЖХ–МС/МС) в образцах мочи добровольцев после однократного перорального приема терапевтической дозы препарата Брейнмакс® и большого количества молока коров, получавших профилактический курс ветпрепаратом Эмидонол®.

Методы. Пробоподготовку образцов мочи для определения мельдония проводили посредством подхода «dilute and shoot», для определения эмоксипина использовали ферментативный гидролиз с β-глюкуронидазой и последующей очисткой методом твердофазной экстракции. Идентификация мельдония и эмоксипина осуществлялась методом ВЭЖХ–МС/МС в условиях электрораспылительной ионизации с регистрацией положительно-заряженных ионов в режиме мониторинга селективных (выбранных) реакций (SRM) по следующим переходам и энергиям соударения: 147.1 > 147.1 (15), 147.1 > 132.1 (17), 147.1 > 58.1 (17), 147.1 > 59.1 (17), 147.1 > 42.1 (60) для мельдония и 138.1 > 138.1 (7), 138.1 > 123.1 (15), 138.1 > 110.1 (20), 138.1 > 95.1 (20) для эмоксипина.

Результаты. Показана возможность одновременной идентификации мельдония, определенного прямым разбавлением, и эмоксипина, полученного после ферментативного гидролиза β-глюкуронидазой, в образцах мочи добровольцев после перорального приема однократной дозы препарата Брейнмакс® и употребления большого количества молока, загрязненного Эмидонолом®, методом ВЭЖХ–МС/МС с использованием различного количества и вариантов SRM-переходов. Установлены различия в профилях выведения данных веществ после приема больших количеств контаминированного молока и однократного перорального приема препарата Брейнмакс® спустя 15–18 ч и позже. После приема контаминированного молока спустя 12 ч и позже эмоксипин определяется в концентрациях в 5 и более раз превышающих концентрации мельдония и выводится более длительное время. При однократном приеме препарата Брейнмакс®, содержащего оба вещества, напротив, содержание мельдония в образцах мочи добровольцев спустя 15–18 ч и позднее после приема в несколько раз выше по отношению к эмоксипину. Также обнаружено, что постоянное соотношение оценочных концентраций мельдония и эмоксипина в чистом препарате Эмидонол® соответствует 1 : 2.

Выводы. Идентификация мельдония в присутствии эмоксипина в моче при определенных условиях может быть использована для отличия контаминации продуктов питания запрещенным модулятором метаболизма от намеренного приема реального допинга.

1. Васильев А.А., Галатдинова И.А., Жигалова Ю.А. Ихтиотоксикологические свойства Эмидонола® 20%. Вестник АПК Ставрополья. 2015;(спецвыпуск 1):13–15.

2. Jędrejko K., Catlin O., Stewart T., Muszyńska B. Mexidol, Cytoflavin, and succinic acid derivatives as antihypoxic, antiischemic metabolic modulators, and ergogenic aids in athletes and consideration of their potential as performance enhancing drugs. Drug Test. Anal. 2024;16(12):1436–1467. https://doi.org/10.1002/dta.3655

3. Постников П.В., Полосин А.В., Савельева Н.Б., Курбаткин С.А., Ефимова Ю.А., Мочалова Е.С. Идентификация метаболитов гипоксена в образцах мочи методом газовой хроматографии – тандемной масс-спектрометрии с целью антидопингового контроля. Тонк. хим. технологии. 2024;19(5):393–407. https://doi.org/10.32362/2410-6593-2024-19-5-393-407

4. Temerdashev A., Azaryan A., Dmitrieva E. Meldonium determination in milk and meat through UHPLC-HRMS. Heliyon. 2020;6(8):e04771. https://doi.org/10.1016/j.heliyon.2020.e04771

5. Постников П.В., Полосин А.В., Мочалова Е.С., Орджоникидзе З.Г., Никитюк Д.Б., Тутельян В.А. Выделение мельдония в моче добровольцев методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией после употребления молока коров, прошедших профилактический курс применения ветеринарного препарата Эмидонол®. Вопросы питания. 2024;93(5):94–103. https://doi.org/10.33029/0042-8833-2024-93-5-94-103

6. Guddat S., Görgens C., Sobolevsky T., Thevis M. Meldonium residues in milk: A possible scenario for inadvertent doping in sports? Drug Test. Anal. 2021;13(11–12):1906–1910. https://doi.org/10.1002/dta.3145

7. Лукьянова Л.Д., Кирова Ю.И., Германова Э.Л. Роль сукцината в регуляции срочной экспрессии HIF-1α при гипоксии. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2017;164(9):273–279.

8. Воронина Т.А., Капица И.Г., Иванова Е.А. Сравнительное исследование влияния мексидола и милдроната на физическую работоспособность в эксперименте. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2017;117(4): 71–74. https://doi.org/10.17116/jnevro20171174171-74

9. Сариев А.К., Кравцова О.Ю., Жердев В.П., Бердимуратова Г.Д., Абдрахманов М.Ж., Середенин С.Б. Кинетика экскреции мексидола и его глюкуроноконъюгированного метаболита у добровольцев популяций казахов и русских. Клиническая Фармакокинетика. 2005;1(2): 23–28.

10. RabinO., UibaV., MiroshnikovaYu., ZabelinM., SamoylovA., Karkischenko V., Semyonov S., Astrelina T., Razinkin S. Meldonium long-term excretion period and pharmacokinetics in blood and urine of healthy athlete volunteers. Drug Test. Anal. 2019;11(4):554–566. https://doi.org/10.1002/dta.2521