Разработка тест-системы для анализа эффекта «смены матрицы» при обратной транскрипции in vitro
Аннотация
Предложена система in vitro для анализа эффекта «смены матрицы» РНК-зависимой ДНК-полимеразой в ходе реакции обратной транскрипции. Реализуется подход, основанный на ступенчатой обратной транскрипции - полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР). В качестве матрицы используется РНК, имеющая участок со стабильной вторичной структурой, который фланкирован короткими гомологичными фрагментами. Описанная система может найти применение при тестировании эффективности работы новых и существующих мутантных форм обратных транскриптаз, предназначенных для решения исследовательских и генноинженерных задач.
Об авторах
А. Ю. Комков
Институт биоорганической химии им. академиков
М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН
Россия
аспирант, инженер- исследователь
Россия
аспирант, инженер- исследователь
Ю. Б. Лебедев
Институт биоорганической химии им. академиков
М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН
Россия
заведующий лабораторией
Россия
заведующий лабораторией
В. И. Швец
МИТХТ им. М.В. Ломоносова, 119571, Москва, пр-т Вернадского, д. 86
Россия
кафедра Биотехнологии и бионанотехнологии, заведующий кафедрой
Россия
кафедра Биотехнологии и бионанотехнологии, заведующий кафедрой
Список литературы
1. Amariglio N., Rechavi G. A-to-I RNA editing: А new regulatory mechanism of global gene expression // Blood Cells Mol. Dis. 2007. V. 39. № 2. p. 151-155.
2. Maas S., Kawahara Y., Tamburro K.M., Nishikura K. A-to-I RNA editing and human disease // RNA Biol. 2006. V. 3. № 1. p. 1-9.
3. Lopez-Saavedra A., Herrera L.A. The role of alternative mRNA splicing in chromosome instability // Mutat. Res. 2010. V. 705. № 3. p. 246-251.
4. Hallegger M., Llorian M., Smith C.W. Alternative splicing: Global insights // FEBS J. 2010. V. 277. № 4. p. 856-866.
5. David C. J., Manley J.L. Alternative pre-mRNA splicing regulation in cancer: Pathways and programs unhinged // Genes Dev. 2010. V. 24. № 21. p. 2343-2364.
6. Khanna A., Stamm S. Regulation of alternative splicing by short non-coding nuclear RNAs // RNA Biol. 2010. V. 7. № 4. p. 480-485.
7. Huang Y., Shen X.J., Zou Q., Zhao Q.L. Biological functions of microRNAs // Биоорган. химия. 2010. Т. 36. № 6. С. 747-752.
8. Huntzinger E., Izaurralde E. Gene silencing by microRNAs: Сontributions of translational repression and mRNA decay // Nat. Rev. Genet. 2011. V. 12. № 2. p. 99-110.
9. Wang K.C., Chang H.Y. Molecular mechanisms of long noncoding RNAs // Mol. Cell. 2011. V. 43. № 6. p. 904-914.
10. Wapinski O., Chang H.Y. Long noncoding RNAs and human disease // Trends Cell Biol. 2011. V. 21. № 6. p. 354-361.
11. Liao Q., Liu C., Yuan X., Kang S., Miao R., Xiao H., Zhao G., Luo H., Bu D., Zhao H., Skogerbо G., Wu Z., Zhao Y. Large-scale prediction of long non-coding RNA functions in a coding-non-coding gene co-expression network // Nucleic Acids Res. 2011. V. 39. № 9. p. 3864-3878.
12. Temin H.M. Proceedings: Molecular mechanisms for cancer induction by viruses // Proc. Natl. Cancer Conf. 1972. V. 7. P. 415-419.
13. Gilboa E., Mitra S. W., Goff S., Baltimore D. A detailed model of reverse transcription and tests of crucial aspects // Cell. 1979. V. 18. № 1. p. 93-100.
14. Temin H.M. Retrovirus variation and reverse transcription: abnormal strand transfers result in retrovirus genetic variation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. V. 90. № 15. p. 6900-6903.
15. Roy S. W., Irimia M. When good transcripts go bad: Artifactual RT-PCR 'splicing' and genome analysis // Bioessays. 2008. V. 30. № 6. p. 601-605.
16. Cocquet J., Chong A., Zhang G., Veitia R.A. Reverse transcriptase template switching and false alternative transcripts // Genomics. 2006. V. 88. № 1. p. 127-131.
17. Houseley J., Tollervey D. Apparent non-canonical trans-splicing is generated by reverse transcriptase in vitro // PLoS One. 2010. V. 5. № 8. p. e12271.
18. International human genome consortium. Initial sequencing and analysis of the human genome // Nature. 2001. V. 409. № 6822. p. 860-921.
19. Osenberg S, Dominissini D, Rechavi G., Eisenberg E. Widespread a cleavage of A-to-I hyperediting substrates // RNA. 2009. V. 15. № 9. P. 1632-1639.
20. Sambrook J., Russel D. Molecular cloning: A laboratory manual. - New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001. 2344 p.
Рецензия
Для цитирования:
Комков А.Ю., Лебедев Ю.Б., Швец В.И. Разработка тест-системы для анализа эффекта «смены матрицы» при обратной транскрипции in vitro. Тонкие химические технологии. 2011;6(6):77-83.
For citation:
Komkov A.Y., Lebedev Y.B., Shvets V.I. Test system creation for analysis of template switching effect during a reverse transcription in vitro. Fine Chemical Technologies. 2011;6(6):77-83. (In Russ.)
Просмотров:
357
Послать статью по эл. почте 
