Постников Павел Викторович, к.х.н., начальник отдела допингового контроля
105005, Москва, Елизаветинский пер., д. 10, стр. 1
Scopus Author ID 57021610900
Pavel V. Postnikov, Cand. Sci. (Chem.), Head of the Doping Control Department
10-1, Elizavetinskii per., Moscow, 105005
Scopus Author ID 57021610900
Аскретков Александр Дмитриевич, к.фарм.н., старший специалист, отдел допингового контроля
105005, Москва, Елизаветинский пер., д. 10, стр. 1
Scopus Author ID 57196465758
Alexander D. Askretkov, Cand. Sci. (Pharm.), Senior Specialist, Doping Control Department
10-1, Elizavetinskii per., Moscow, 105005
Scopus Author ID 57196465758
Полосин Андрей Вячеславович, главный специалист, отдел допингового контроля
105005, Москва, Елизаветинский пер., д. 10, стр. 1
Andrey V. Polosin, Chief Specialist, Doping Control Department
10-1, Elizavetinskii per., Moscow, 105005
Ефимова Юлия Александровна, к.х.н., доцент, кафедра аналитической химии им. И.П. Алимарина
119454, Москва, пр-т Вернадского, д. 78
Scopus Author ID 25228417800
Yuliya A. Efimova, Cand. Sci. (Chem.), Assistant Professor, I.P. Alimarin Department of Analitical Chemistry
78, Vernadskogo pr., Moscow, 119454
Scopus Author ID 25228417800
Мочалова Елена Сергеевна, исполняющая обязанности директора Национальной антидопинговой лаборатории (Института)
105005, Москва, Елизаветинский пер., д. 10, стр. 1
Scopus Author ID 56416432400
Elena S. Mochalova, Acting Director
10-1, Elizavetinskii per., Moscow, 105005
Scopus Author ID 56416432400
Objectives. Emidonol® is a veterinary drug used to treat pathological conditions associated with hypoxia in cattle. In addition tomeldonium, which is included in the Prohibited List of the World Anti-Doping Agency, the biotransformation product of Emidonol® in animals is the antioxidant and antihypoxant emoxypine, which can act as a marker of contamination of food products with the above-mentioned widely known metabolic modulator. The study set out to semiquantitatively determine emoxypine and meldonium levels, as well as to compare the excretion profiles of these substances by high-performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry (HPLC–MS/MS) in urine samples of volunteers after receiving a single oral administration of a therapeutic dose of Brainmax® and after consuming a large amount of milk from cows that had received a prophylactic course of Emidonol®.
Methods. Sample preparation of urine samples for the determination of meldonium was carried out using the “dilute and shoot” approach. Enzymatic hydrolysis with β-glucuronidase followed by purification by solid-phase extraction was used to determine emoxypine. Identification of meldonium and emoxypine was carried out by HPLC–MS/MS under conditions of electrospray ionization with registration of positively charged ions in the selective reaction monitoring (SRM) mode for the following transitions and collision energies: for meldonium, 147.1 > 147.1 (15), 147.1 > 132.1 (17), 147.1 > 58.1 (17), 147.1 > 59.1 (17), 147.1 > 42.1 (60); for emoxypine, 138.1 > 138.1 (7), 138.1 > 123.1 (15), 138.1 > 110.1 (20), 138.1 > 95.1 (20).
Results. The possibility of simultaneous identifying meldonium and emoxypine obtained after enzymatic hydrolysis with β-glucuronidase in urine samples of volunteers after oral intake of single dose of Brainmax® and consuming a large amount of Emidonol®-contaminated milk using the HPLC–MS/MS method with different numbers and variants of SRM transitions was demonstrated. Differences in the excretion profiles of these substances were found after ingestion of large amounts of contaminated milk and a single oral dose of Brainmax® 15–18 h later and further. After taking contaminated milk 12 h or more later, emoxypine is detected in concentrations 5 or more times higher than meldonium concentrations and is excreted for a longer period of time. Conversely, after taking a single dose of Brainmax®, which contains both substances, the content of meldonium in urine samples of volunteers 15–18 h after taking it is several times higher in relation to emoxypine. The constant ratio of estimated concentrations of meldonium and emoxypine in Emidonol® was found to be approximately 1 : 2.
Conclusions. Identification of meldonium in the presence of emoxypine in urine under certain conditions can be used to distinguish contamination of food products with a prohibited metabolic modulator from intentional ingestion of real doping.
Цели. Эмидонол® — лекарственный препарат ветеринарного назначения, применяемый для лечения у крупного рогатого скота патологических состояний, связанных с гипоксией. Продуктом биотрансформации Эмидонола® в организме животных помимо мельдония, входящего в Запрещенный список Всемирного антидопингового агентства, является антиоксидант и антигипоксант эмоксипин, который может выступать в качестве маркера контаминации продуктов питания вышеуказанным получившим широкую известность модулятором метаболизма. Цель исследования заключалась в полуколичественном определении эмоксипина и мельдония и сравнении профилей выведения этих веществ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии–тандемной масс-спектрометрии (ВЭЖХ–МС/МС) в образцах мочи добровольцев после однократного перорального приема терапевтической дозы препарата Брейнмакс® и большого количества молока коров, получавших профилактический курс ветпрепаратом Эмидонол®.
Методы. Пробоподготовку образцов мочи для определения мельдония проводили посредством подхода «dilute and shoot», для определения эмоксипина использовали ферментативный гидролиз с β-глюкуронидазой и последующей очисткой методом твердофазной экстракции. Идентификация мельдония и эмоксипина осуществлялась методом ВЭЖХ–МС/МС в условиях электрораспылительной ионизации с регистрацией положительно-заряженных ионов в режиме мониторинга селективных (выбранных) реакций (SRM) по следующим переходам и энергиям соударения: 147.1 > 147.1 (15), 147.1 > 132.1 (17), 147.1 > 58.1 (17), 147.1 > 59.1 (17), 147.1 > 42.1 (60) для мельдония и 138.1 > 138.1 (7), 138.1 > 123.1 (15), 138.1 > 110.1 (20), 138.1 > 95.1 (20) для эмоксипина.
Результаты. Показана возможность одновременной идентификации мельдония, определенного прямым разбавлением, и эмоксипина, полученного после ферментативного гидролиза β-глюкуронидазой, в образцах мочи добровольцев после перорального приема однократной дозы препарата Брейнмакс® и употребления большого количества молока, загрязненного Эмидонолом®, методом ВЭЖХ–МС/МС с использованием различного количества и вариантов SRM-переходов. Установлены различия в профилях выведения данных веществ после приема больших количеств контаминированного молока и однократного перорального приема препарата Брейнмакс® спустя 15–18 ч и позже. После приема контаминированного молока спустя 12 ч и позже эмоксипин определяется в концентрациях в 5 и более раз превышающих концентрации мельдония и выводится более длительное время. При однократном приеме препарата Брейнмакс®, содержащего оба вещества, напротив, содержание мельдония в образцах мочи добровольцев спустя 15–18 ч и позднее после приема в несколько раз выше по отношению к эмоксипину. Также обнаружено, что постоянное соотношение оценочных концентраций мельдония и эмоксипина в чистом препарате Эмидонол® соответствует 1 : 2.
Выводы. Идентификация мельдония в присутствии эмоксипина в моче при определенных условиях может быть использована для отличия контаминации продуктов питания запрещенным модулятором метаболизма от намеренного приема реального допинга.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.