chemicallytechFine Chemical TechnologiesТонкие химические технологии2410-65932686-7575MIREA – Russian Technological University (RTU MIREA).10.32362/2410-6593-2022-17-5-384-393chemicallytech-1880Research ArticleBIOCHEMISTRY AND BIOTECHNOLOGYБИОХИМИЯ И БИОТЕХНОЛОГИЯEffect of antiviral siRNAs on the production of cytokines in vitroДействие противовирусных миРНК на выработку цитокинов in vitrohttps://orcid.org/0000-0003-4295-7858ПакА. В.PakA. V.

Пак Анастасия Витальевна, студент, Институт клинической медицины им. Н.В. Склифосовского

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

Anastasia V. Pak, Student, Institute of Clinical Medicine

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991

dcnnpk@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-5682-4581ПашковЕ. А.PashkovE. A.

Пашков Евгений Алексеевич, аспирант, кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии им. академика; младший научный сотрудник, лаборатория молекулярной иммунологии А.А. Воробьева

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

SPIN-код РИНЦ 4933-1128

Evgeny A. Pashkov, Postgraduate Student, A.A. Vorobiev Department of Microbiology, Virology and Immunology; Junior Researcher, Laboratory of Molecular Immunology

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

RSCI SPIN-code 4933-1128

pashckov.j@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-7307-0515АбрамоваН. Д.AbramovaN. D.

Абрамова Наталья Дмитриевна, младший научный сотрудник, лаборатория молекулярной иммунологии

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

SPIN-код РИНЦ 1763-8942

Natalia D. Abramova, Junior Researcher, Laboratory of Molecular Immunology

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

RSCI SPIN-code 1763-8942

and960911@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0001-8962-4765ПоддубиковА. В.PoddubikovA. V.

Поддубиков Александр Владимирович, к.б.н., заведующий лабораторией микробиологии условно-патогенных бактерий

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

SPIN-код РИНЦ 9658-1553

Alexander A. Poddubikov, Cand. Sci. (Biol.), Head of the Laboratory of Microbiology of Opportunistic Pathogenic Bacteria

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

RSCI SPIN-code 9658-1

poddubikov@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8204-4899НагиеваФ. Г.NagievaF. G.

Нагиева Фирая Галиевна, д.м.н., доцент, заведующий лабораторией гибридных клеточных культур

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

SPIN-код РИНЦ 5897-3591

Firaya G. Nagieva, Dr. Sci. (Med.), Associate Professor, Head of the Laboratory of Hybrid Cell Cultures

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

RSCI SPIN-code 5897-3591

fgn42@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5620-1843БогдановаЕ. А.BogdanovaE. A.

Богданова Екатерина Александровна, к.м.н., доцент кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии им. академика А.А. Воробьева

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

SPIN-код РИНЦ 7250-5808

Ekaterina A. Bogdanova, Cand. Sci. (Med.), Associate Professor, A.A. Vorobiev Department of Microbiology, Virology and Immunology

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991

RSCI SPIN-code 7250-5808

bogdekaterin@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-4963-5053ПашковЕ. П.PashkovE. P.

Пашков Евгений Петрович, д.м.н., профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии им. академика А.А. Воробьева

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

Evgeny P. Pashkov, Dr. Sci. (Med.), Professor, A.A. Vorobiev Department of Microbiology, Virology and Immunology

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991

9153183256@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1757-8389СвитичО. А.SvitichO. A.

Свитич Оксана Анатольевна, чл.-корр. Российской академии наук, д.м.н., директор, заведующий лабораторией молекулярной иммунологии; профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии им. академика А.А. Воробьева

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

SPIN-код РИНЦ 8802-5569

Oxana A. Svitich, Corresponding Member of the Russian Academy of Sciences, Dr. Sci. (Med.), Head of the Federal State Budgetary Scientific Institution, Head of the Laboratory of Molecular Immunology, Federal State Budgetary Scientific Institution; Professor, A.A. Vorobiev Department of Microbiology, Virology and Immunology

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991

RSCI SPIN-code 8802-5569

svitichoa@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0017-1892ЗверевВ. В.ZverevV. V.

Зверев Виталий Васильевич, академик РАН, д.б.н., профессор, научный руководитель; заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии и иммунологии им. академика А.А. Воробьева

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

SPIN-код РИНЦ 2122-1808

Vitaliy V. Zverev, Full Member of the Russian Academy of Sciences, Dr. Sci. (Biol.), Scientific Director of the Federal State Budgetary Scientific Institution; Head of the A.A. Vorobiev Department of Microbiology, Virology and Immunology

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991

RSCI SPIN-code 2122-1808

vitalyzverev@outlook.comПервый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)РоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University)Russian FederationПервый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет); Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова Минздрава РоссииРоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University); I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and SeraRussian FederationНаучно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова Минздрава РоссииРоссияI. Mechnikov Research Institute of Vaccines and SeraRussian FederationПервый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)РоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University),Russian Federation202220112022175384393Copyright © Pak A.V., Pashkov E.A., Abramova N.D., Poddubikov A.V., Nagieva F.G., Bogdanova E.A., Pashkov E.P., Svitich O.A., Zverev V.V., 20222022Пак А.В., Пашков Е.А., Абрамова Н.Д., Поддубиков А.В., Нагиева Ф.Г., Богданова Е.А., Пашков Е.П., Свитич О.А., Зверев В.В.Pak A.V., Pashkov E.A., Abramova N.D., Poddubikov A.V., Nagieva F.G., Bogdanova E.A., Pashkov E.P., Svitich O.A., Zverev V.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.finechem-mirea.ru/jour/article/view/1880

Objectives. To evaluate the dynamics of the expression level of IL-1β and IL-28β (IFN-λ3) genes as a result of complex knockdown of some cellular genes, whose expression products play an important role in the reproduction of the influenza virus.Methods. Following the collection of virus-containing liquid and cell lysate within three days from the moment of transfection and infection, the intensity of viral reproduction was assessed using the cytopathic effect titration method. The concentration of viral ribonucleic acid (vRNA) and change in the expression of IL-1β and IL-28β (IFN-λ3) were determined by real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction (real-time RT-qPCR). The nonparametric Mann–Whitney test was used to statistically calculate significant differences between groups.Results. The use of each small interfering ribonucleic acid (siRNA) complex led to a decrease in viral reproduction on the first day at the multiplicity of infection (MOI) of 0.001. The use of complex A (FLT4.2 + Nup98.1) and D (FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205) led to a decrease in viral titer by 2.8 lgTCID50/mL and by 2.1 lgTCID50/mL relative to the use of nonspecific L2 siRNA and viral control (p ≤ 0.05). Transfection of complexes B (Nup98.1 + Nup205) and C (FLT4.2 + Nup205) also reduced the viral titer by 1.5 lgTCID50/mL and 1.8 lgTCID50/mL relative to nonspecific L2 siRNA and viral control (p ≤ 0.05). When conducting real-time RT-qPCR, a significant decrease in the concentration of viral RNA was also noted. When using complexes B, C, and D, the concentration of vRNA decreased on the first day by 14.5, 4.1, and 15 times, respectively. On the second day, a decrease in vRNA was observed in cells with B and D complexes by 17.1 and 18.3 times (p ≤ 0.05). Along with a decrease in the viral titer and vRNA, an increase in the expression of the IL-1β and IL-28β genes was observed on the first day when using all siRNA complexes relative to nonspecific and viral controls (p ≤ 0.05). On the second day, an increase was also observed in cells with A and D complexes, while on the third day, there was an increase in the expression of these genes in cells with complex D (p ≤ 0.05).Conclusions. The use of siRNA complexes is shown to have a pronounced antiviral effect while simultaneously suppressing the activity of cellular genes (FLT4, Nup98 and Nup205). In parallel, the transfection of complexes that block the formation of expression products necessary for viral reproduction is demonstrated to lead to an increase in the level of expression of the IL-1β and IL-28β genes. These results indicate not only that the use of siRNA has antiviral activity, but also immunomodulatory activity, which can contribute to a more effective immune response of the body.

Цели. Оценить динамику уровня экспрессии генов IL-1β и IL-28β (IFN-λ3) в результате комплексного нокдауна некоторых клеточных генов, чьи продукты экспрессии играют важную роль в репродукции вируса гриппа.Методы. Вируссодержащую жидкость и клеточный лизат отбирали в течение 3-х дней с момента трансфекции и заражения и оценивали интенсивность вирусной репродукции методами титрования по цитопатическому действию. Концентрацию вирусной рибонуклеиновой кислоты (вРНК) и изменение экспрессии IL-1β и IL-28β (IFN-λ3) определяли методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ОТ-ПЦР-РВ). Для вычисления статистически значимых различий между группами использовали непараметрический критерий Манна-Уитни.Результаты. Использование каждого комплекса малых интерферирующих РНК (миРНК) приводило к снижению вирусной репродукции на 1-е сутки при множественности заражения 0.001. Применение комплексов A (FLT4.2 + Nup98.1) и D (FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205) приводило к снижению вирусного титра на 2.8 lgТЦД50/мл и на 2.1 lgТЦД50/мл относительно применения неспецифической миРНК L2 и вирусного контроля (р ≤ 0.05). результате трансфекции комплексов B (Nup98.1 + Nup205) и C (FLT4.2 + Nup205) вирусный титр также снижался на 1.5 lgТЦД50/мл и 1.8 lgТЦД50/мл соответственно относительно неспецифической миРНК L2 и вирусного контроля (р ≤ 0.05). При проведении ОТ-ПЦР-РВ также было отмечено достоверное уменьшение концентрации вРНК. При использовании комплексов B, C и D концентрация вРНК снижалась на 1-е сутки в 14.5, 4.1 и 15.0 раз соответственно. На 2-е сутки в клетках с комплексами B и D наблюдалось уменьшение концентрации вРНК в 17.1 и 18.3 раз (р ≤ 0.05). Наряду со снижением вирусного титра и вРНК наблюдалось повышение экспрессии генов IL-1β и IL-28β на 1-е сутки при использовании всех комплексов миРНК относительно неспецифического и вирусного контроля (р ≤ 0.05). На 2-е сутки также наблюдалось повышение экспрессии в клетках с комплексами A и D, а на третьи – в клетках с комплексом D (р ≤0.05).Выводы. Исследование показало, что применение комплексов миРНК приводит к выраженному противовирусному эффекту при одновременном подавлении активности клеточных генов (FLT4, Nup98 и Nup205). Параллельно с этим было выявлено, что при трансфекции комплексов, блокирующих образование продуктов экспрессии, необходимых для вирусной репродукции, повышается уровень экспрессии генов IL-1β и IL-28β. Данные результаты свидетельствуют о том, что используемые миРНК обладают не только противовирусной, но также и иммуномодулирующей активностью, что способствует более эффективному иммунному ответу организма.

РНК-интерференцияIL-1βвирус гриппа АIFN-λ3экспрессия геновмиРНКпровоспалительные цитокиныIL-28βвирусная РНКRNA interferenceIL-1βinfluenza A virusIFN-λ3gene expressionsiRNApro-inflammatory cytokinesIL-28βviral RNAИсследование выполнено с использованием научного оборудования Центра коллективного пользования Научно-исследовательского института вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова Министерства здравоохранения Российской Федерации при финансовой поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, соглашение № 075-15-2021-676 от 28.07.2021.The study was carried out using the scientific equipment of the Center for Collective Use of the I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, and supported by the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation, Agreement No. 075-15-2021-676 dated July 28, 2021.ReferencesПашков Е.А., Коротышева М.О., Пак А.В., Файзулоев Е.Б., Сидоров А.В., Поддубиков А.В., Быстрицкая Е.П., Дронина Ю.Е., Солнцева В.К., Зайцева Т.А., Пашков Е.П., Быков А.С., Свитич О.А., Зверев В.В. Исследование противогриппозной активности комплексов миРНК против клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 на модели in vitro. Тонкие химические технологии. 2022;17(2):140–151. https://doi.org/10.32362/2410-6593-2022-17-2-140-151Pashkov E.A., Korotysheva M.O., Pak A.V., Faizuloev E.Β., Sidorov A.V., Poddubikov A.V., Βystritskaya E.P., Dronina Y.E., Solntseva V.K., Zaiceva T.A., Pashkov E.P., Βykov A.S., Svitich O.A., Zverev V.V. Investigation of the anti-influenza activity of siRNA complexes against the cellular genes FLT4, Nup98, and Nup205 in vitro. Tonk. Khim. Tekhnol. = Fine Chem. Technol. 2022;17(2):140–151 (in Russ.). https:// doi.org/10.32362/2410-6593-2022-17-2-140-151Пашков Е.А., Файзулоев Е.Б., Корчевая Е.Р., Ртищев А.А., Черепович Б.С., Сидоров А.В., Поддубиков А.В., Быстрицкая Е.П., Дронина Ю.Е., Быков А.С., Свитич О.А., Зверев В.В. Нокдаун клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 как супрессор вирусной активности гриппа А/WSN/33 (H1N1) в культуре клеток А549. Тонкие химические технологии. 2021;16(6):476–489. https://doi.org/10.32362/2410-6593-2021-16-6-476-489Pashkov E.A., Faizuloev E.B., Korchevaya E.R., Rtishchev A.A., Cherepovich B.S., Sidorov А.V., Poddubikov A.V., Bystritskaya Е.P., Dronina Yu.E., Bykov A.S., Svitich O.А., Zverev V.V. Knockdown of FLT4, Nup98, and Nup205 cellular genes as a suppressor for the viral activity of Influenza A/WSN/33 (H1N1) in A549 cell culture. Tonk. Khim. Tekhnol. = Fine Chem. Technol. 2021;16(6):476–489 (in Russ.). https://doi.org/10.32362/2410-6593-2021-16-6-476-489Sellers S.A., Hagan R.S., Hayden F.G., Fischer W.A. II. The hidden burden of influenza: A review of the extrapulmonary complications of influenza infection. Influenza Other Respir. Viruses. 2017;11(5):372–393. https://doi.org/10.1111/irv.12470Sellers S.A., Hagan R.S., Hayden F.G., Fischer W.A. II. The hidden burden of influenza: A review of the extrapulmonary complications of influenza infection. Influenza Other Respir. Viruses. 2017;11(5):372–393. https://doi.org/10.1111/irv.12470Koehler P., Βassetti M., Kochanek M., Shimabukuro-Vornhagen A., Cornely O.A. Intensive care management of influenza-associated pulmonary aspergillosis. Clin. Microbiol. Infect. 2019;25(12):1501–1509. https://doi.org/10.1016/j.cmi.2019.04.031Koehler P., Βassetti M., Kochanek M., Shimabukuro-Vornhagen A., Cornely O.A. Intensive care management of influenza-associated pulmonary aspergillosis. Clin. Microbiol. Infect. 2019;25(12):1501–1509. https://doi.org/10.1016/j.cmi.2019.04.031Radzišauskienė D., Vitkauskaitė M., Žvinytė K., Mameniškienė R. Neurological complications of pandemic A(H1N1)2009pdm, postpandemic A(H1N1)v, and seasonal influenza A. Βrain Βehav. 2021;11(1):e01916. https://doi.org/10.1002/brb3.1916Radzišauskienė D., Vitkauskaitė M., Žvinytė K., Mameniškienė R. Neurological complications of pandemic A(H1N1)2009pdm, postpandemic A(H1N1)v, and seasonal influenza A. Βrain Βehav. 2021;11(1):e01916. https://doi.org/10.1002/brb3.1916Kalil A.C., Thomas P.G. Influenza virus-related critical illness: pathophysiology and epidemiology. Crit. Care. 2019;23(1):258. https://doi.org/10.1186/s13054-019-2539-xKalil A.C., Thomas P.G. Influenza virus-related critical illness: pathophysiology and epidemiology. Crit. Care. 2019;23(1):258. https://doi.org/10.1186/s13054-019-2539-xPlotnikova M.A., Klotchenko S.A., Vasin A.V. Development of a multiplex quantitative PCR assay for the analysis of human cytokine gene expression in influenza A virus-infected cells. J. Immunol. Methods. 2016;430:51–55. https://doi.org/10.1016/j.jim.2016.01.005Plotnikova M.A., Klotchenko S.A., Vasin A.V. Development of a multiplex quantitative PCR assay for the analysis of human cytokine gene expression in influenza A virus-infected cells. J. Immunol. Methods. 2016;430:51–55. https://doi.org/10.1016/j.jim.2016.01.005Wang J., Wu Y., Ma C., Fiorin G., Wang J., Pinto L.H., et al. Structure and inhibition of the drug-resistant S31N mutant of the M2 ion channel of influenza A virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2013;110(4):1315–1320. https://doi.org/10.1073/pnas.1216526110Wang J., Wu Y., Ma C., Fiorin G., Wang J., Pinto L.H., et al. Structure and inhibition of the drug-resistant S31N mutant of the M2 ion channel of influenza A virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2013;110(4):1315–1320. https://doi.org/10.1073/pnas.1216526110Lampejo T. Influenza and antiviral resistance: an overview. Eur. J. Clin. Microβiol. Infect. Dis. 2020;39(7):1201–1208. https://doi.org/10.1007/s10096-020-03840-9Lampejo T. Influenza and antiviral resistance: an overview. Eur. J. Clin. Microβiol. Infect. Dis. 2020;39(7):1201–1208. https://doi.org/10.1007/s10096-020-03840-9Leneva I.A., Russell R.J., Βoriskin Y.S., Hay A.J. Characteristics of arbidol-resistant mutants of influenza virus: Implications for the mechanism of anti-influenza action of arbidol. Antiviral Res. 2009;81(2):132–140. https://doi.org/10.1016/j.antiviral.2008.10.009Leneva I.A., Russell R.J., Βoriskin Y.S., Hay A.J. Characteristics of arbidol-resistant mutants of influenza virus: Implications for the mechanism of anti-influenza action of arbidol. Antiviral Res. 2009;81(2):132–140. https://doi.org/10.1016/j.antiviral.2008.10.009Goldhill D.H., Te Velthuis A.J.W., Fletcher R.A., Langat P., Zambon M., Lackenby A., Βarclay W.S. The mechanism of resistance to favipiravir in influenza. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2018;115(45):11613–11618. https://doi.org/10.1073/pnas.1811345115Goldhill D.H., Te Velthuis A.J.W., Fletcher R.A., Langat P., Zambon M., Lackenby A., Βarclay W.S. The mechanism of resistance to favipiravir in influenza. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2018;115(45):11613–11618. https://doi.org/10.1073/pnas.1811345115Yang H., Winkler W., Wu X. Interferon Inducer IFI35 regulates RIG-I-mediated innate antiviral response through mutual antagonism with Influenza protein NS1. J. Virol. 2021;95(11):e00283–21. https://doi.org/10.1128/jvi.00283-21Yang H., Winkler W., Wu X. Interferon Inducer IFI35 regulates RIG-I-mediated innate antiviral response through mutual antagonism with Influenza protein NS1. J. Virol. 2021;95(11):e00283–21. https://doi.org/10.1128/jvi.00283-21Sa Ribero M., Jouvenet N., Dreux M., Nisole S. Interplay between SARS-CoV-2 and the type I interferon response. PLoS Pathog. 2020;16(7):e1008737. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008737Sa Ribero M., Jouvenet N., Dreux M., Nisole S. Interplay between SARS-CoV-2 and the type I interferon response. PLoS Pathog. 2020;16(7):e1008737. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008737Hauser P., Khosla J., Aurora H., Laurin J., Kling M.A., Hill J., Gulati M., Thornton A.J., Schultz R.L., Valentine A.D., Meyers C.A., Howell C.D. A prospective study of the incidence and open-label treatment of interferoninduced major depressive disorder in patients with hepatitis C. Mol. Psychiatry. 2002;7(9):942–947. https://doi.org/10.1038/sj.mp.4001119Hauser P., Khosla J., Aurora H., Laurin J., Kling M.A., Hill J., Gulati M., Thornton A.J., Schultz R.L., Valentine A.D., Meyers C.A., Howell C.D. A prospective study of the incidence and open-label treatment of interferoninduced major depressive disorder in patients with hepatitis C. Mol. Psychiatry. 2002;7(9):942–947. https://doi.org/10.1038/sj.mp.4001119Han J., Perez J., Schafer A., Cheng H., Peet N., Rong L., et al. Influenza virus: small molecule therapeutics and mechanisms of antiviral resistance. Curr. Med. Chem. 2018;25(38):5115–5127. https://doi.org/10.2174/0929867324666170920165926Han J., Perez J., Schafer A., Cheng H., Peet N., Rong L., et al. Influenza virus: small molecule therapeutics and mechanisms of antiviral resistance. Curr. Med. Chem. 2018;25(38):5115–5127. https://doi.org/10.2174/0929867324666170920165926Fire A.Z. Gene silencing by double-stranded RNA. Cell Death Differ. 2007;14(12):1998–2012. https://doi.org/10.1038/sj.cdd.4402253Fire A.Z. Gene silencing by double-stranded RNA. Cell Death Differ. 2007;14(12):1998–2012. https://doi.org/10.1038/sj.cdd.4402253Fire A., Xu S.Q., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mell C.C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 1998;391(6669):806–811. https://doi.org/10.1038/35888Fire A., Xu S.Q., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mell C.C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 1998;391(6669):806–811. https://doi.org/10.1038/35888Estrin M.A., Hussein I.T.M., Puryear W.Β., Kuan A.C., Artim S.C., Runstadler J.A. Host-directed combinatorial RNAi improves inhibition of diverse strains of influenza A virus in human respiratory epithelial cells. PLoS One. 2018;13(5):e0197246. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197246Estrin M.A., Hussein I.T.M., Puryear W.Β., Kuan A.C., Artim S.C., Runstadler J.A. Host-directed combinatorial RNAi improves inhibition of diverse strains of influenza A virus in human respiratory epithelial cells. PLoS One. 2018;13(5):e0197246. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197246Пашков Е.А., Корчевая Е.Р., Файзулоев Е.Б., Пашков Е.П., Зайцева Т.А., Ртищев А. А., Поддубиков А.В., Свитич О.А., Зверев В.В. Создание модели изучения противовирусного действия малых интерферирующих РНК in vitro. Санитарный врач. 2022;1. https://doi.org/10.33920/med-08-2201-07Pashkov E.A., Korchevaya E.R., Faizuloev E.B., Pashkov E.P., Zvereva T.A. Rtishchev A.A., Poddubikov A.V., Svitich O.А., Zverev V.V. Creation of model for studying the antiviral effect of small interfering RNAs in vitro. Sanitarnyi vrach. 2022;1 (in Russ.). https://doi.org/10.33920/med-08-2201-07Park H.S., Liu G., Thulasi Raman S.N., Landreth S.L., Liu Q., Zhou Y. NS1 Protein of 2009 Pandemic Influenza A Virus Inhibits Porcine NLRP3 Inflammasome-Mediated Interleukin-1 Βeta Production by Suppressing ASC Uβiquitination. J. Virol. 201828;92(8):e00022–18. https://doi.org/10.1128/JVI.00022-18Park H.S., Liu G., Thulasi Raman S.N., Landreth S.L., Liu Q., Zhou Y. NS1 Protein of 2009 Pandemic Influenza A Virus Inhibits Porcine NLRP3 Inflammasome-Mediated Interleukin-1 Βeta Production by Suppressing ASC Uβiquitination. J. Virol. 201828;92(8):e00022–18. https://doi.org/10.1128/JVI.00022-18Julkunen I., Melén K., Nyqvist M., Pirhonen J., Sareneva T., Matikainen S. Inflammatory responses in influenza A virus infection. Vaccine. 2000;19(Suppl. 1):S32–S37. https://doi.org/10.1016/S0264-410X(00)00275-9Julkunen I., Melén K., Nyqvist M., Pirhonen J., Sareneva T., Matikainen S. Inflammatory responses in influenza A virus infection. Vaccine. 2000;19(Suppl. 1):S32–S37. https://doi.org/10.1016/S0264-410X(00)00275-9Lee H.K, Loh T.P., Lee C.K., Tang J.W., Chiu L., Koay E.S. A universal influenza A and B duplex real-time RT-PCR assay. J. Med. Virol. 2012;84(10):1646–1651. https://doi.org/10.1002/jmv.23375Lee H.K, Loh T.P., Lee C.K., Tang J.W., Chiu L., Koay E.S. A universal influenza A and B duplex real-time RT-PCR assay. J. Med. Virol. 2012;84(10):1646–1651. https://doi.org/10.1002/jmv.23375Piasecka J., Lenartowicz E., Soszynska-Jozwiak M., Szutkowska B., Kierzek R., Kierzek E. RNA Secondary Structure Motifs of the Influenza A Virus as Targets for siRNA-Mediated RNA Interference. Mol. Ther. Nucleic Acids. 2020;19:627–642. https://doi.org/10.1016/j.omtn.2019.12.018Piasecka J., Lenartowicz E., Soszynska-Jozwiak M., Szutkowska B., Kierzek R., Kierzek E. RNA Secondary Structure Motifs of the Influenza A Virus as Targets for siRNA-Mediated RNA Interference. Mol. Ther. Nucleic Acids. 2020;19:627–642. https://doi.org/10.1016/j.omtn.2019.12.018

The authors declare that there are no conflicts of interest present.