chemicallytechFine Chemical TechnologiesТонкие химические технологии2410-65932686-7575MIREA – Russian Technological University (RTU MIREA).10.32362/2410-6593-2022-17-2-140-151chemicallytech-1822Research ArticleBIOCHEMISTRY AND BIOTECHNOLOGYБИОХИМИЯ И БИОТЕХНОЛОГИЯInvestigation of the anti-influenza activity of siRNA complexes against the cellular genes FLT4, Nup98, and Nup205 in vitroИсследование противогриппозной активности комплексов миРНК против клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 на модели in vitrohttps://orcid.org/0000-0002-5682-4581ПашковЕ. А.PashkovE. A.

Пашков Евгений Алексеевич, аспирант, кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии; младший научный сотрудник, лаборатория молекулярной иммунологии

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2; 105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Evgeny A. Pashkov, Postgraduate Student, Department of Microbiology, Virology and Immunology; Junior Researcher, Laboratory of Molecular Immunology

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991; 5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

pashckov.j@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7216-1266КоротышеваМ. О.KorotyshevaM. O.

Коротышева Мария Олеговна, студент, Международная школа «Медицина Будущего»

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

Maria O. Korotysheva, Student, International School «Medicine of the Future»

8, Trubetskaya ul., Moscow

trans.mutation@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-4295-7858ПакА. В.PakA. V.

Пак Анастасия Витальевна, студент, Институт клинической медицины им. Н.В. Склифосовского

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

Anastasia V. Pak, Student, Institute of Clinical Medicine

8, Trubetskaya ul., Moscow

dcnnpk@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0001-7385-5083ФайзулоевЕ. Б.FaizuloevE. B.

Файзулоев Евгений Бахтиёрович, к.б.н., заведующий лабораторией молекулярной вирусологии

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Evgeny B. Faizuloev, Cand. Sci. (Biol.), Head of the Laboratory of Molecular Virology

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

faizuloev@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-3561-8295СидоровА. В.SidorovA. V.

Сидоров Александр Викторович, к.б.н., заведующий лабораторией ДНК-содержащих вирусов

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Alexander V. Sidorov, Cand. Sci. (Biol.), Head of the Laboratory of DNA viruses

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

sashasidorov@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8962-4765ПоддубиковА. В.PoddubikovA. V.

Поддубиков Александр Владимирович, к.б.н., заведующий лабораторией микробиологии условно-патогенных бактерий

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Alexander A. Poddubikov, Cand. Sci. (Biol.), Head of the Laboratory of Microbiology of Opportunistic Pathogenic Bacteria

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

poddubikov@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8430-1975БыстрицкаяЕ. П.BystritskayaE. P.

Быстрицкая Елизавета Петровна, младший научный сотрудник, лаборатория молекулярной вирусологии

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Elizaveta P. Bystritskaya, Junior Researcher, Laboratory of Molecular Immunology

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

lisabystritskaya@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-6269-2108ДронинаЮ. Е.DroninaYu. E.

Дронина Юлия Евгеньевна, к.м.н., доцент кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии; старший научный сотрудник, лаборатория легионеллеза

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2; 123098, Москва, ул. Гамалеи, д. 18

Yuliya E. Dronina, Cand. Sci. (Med.), Associate Professor, Department of Microbiology, Virology and Immunology; Senior Researcher, Laboratory of Legionellosis

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991; 18, Gamaleya ul., Moscow, 123098

droninayu@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-3783-9232СолнцеваВ. К.SolntsevaV. K.

Солнцева Виктория Константиновна, к.м.н., старший преподаватель кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии им. академика А.А. Воробьева

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

Viktoriia K. Solntseva, Cand. Sci. (Med.), Senior Lecturer, A.A. Vorobiev Department of Microbiology, Virology and Immunology

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991

speak_to_vika@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-9205-322XЗайцеваТ. А.ZaicevaT. A.

Зайцева Татьяна Александровна, к.м.н., старший преподаватель кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии им. академика А.А. Воробьева

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

Tatyana A. Zaiceva, Cand. Sci. (Med.), Senior Lecturer, A.A. Vorobiev Department of Microbiology, Virology and Immunology

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991

zat25@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-4963-5053ПашковЕ. П.PashkovE. P.

Пашков Евгений Петрович, д.м.н., профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии им. академика А.А. Воробьева

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

Evgeny P. Pashkov, Dr. Sci. (Med.), Professor, A.A. Vorobiev Department of Microbiology, Virology and Immunology

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991

9153183256@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8099-6201БыковА. С.BykovA. S.

Быков Анатолий Сергеевич, д.м.н., профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

Anatoly S. Bykov, Dr. Sci. (Med.), Professor, Department of Virology and Immunology

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991

bykov@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1757-8389СвитичО. А.SvitichO. A.

Свитич Оксана Анатольевна, чл.-корр. РАН, д.м.н., директор, заведующий лабораторией молекулярной иммунологии; профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2; 105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Oxana A. Svitich, Corresponding Member of the Russian Academy of Sciences, Dr. Sci. (Med.), Head of the Federal State Budgetary Scientific Institution «I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera», Head of the Laboratory of Molecular Immunology; Professor, Department of Microbiolody, Virology and Immunology

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991; 5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

svitichoa@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0017-1892ЗверевВ. В.ZverevV. V.

Зверев Виталий Васильевич, академик РАН, д.б.н., научный руководитель Научно-исследовательского института вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова; заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии и иммунологии

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2; 105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Vitaliy V. Zverev, Full Member of the Russian Academy of Sciences, Dr. Sci. (Biol.), Scientific Director; Head of the Department of Microbiolody, Virology and Immunology

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991; 5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

vitalyzverev@outlook.comПервый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет); Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова Минздрава РоссииРоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University); I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and SeraRussian FederationПервый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)РоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University)Russian FederationНаучно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова Минздрава РоссииРоссияI. Mechnikov Research Institute of Vaccines and SeraRussian FederationПервый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет); Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н.Ф. Гамалеи Минздрава РоссииРоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University); N.F. Gamaleya National Research Center for Epidemiology and MicrobiologyRussian Federation202231052022172140151Copyright © Pashkov E.A., Korotysheva M.O., Pak A.V., Faizuloev E.B., Sidorov A.V., Poddubikov A.V., Bystritskaya E.P., Dronina Y.E., Solntseva V.K., Zaiceva T.A., Pashkov E.P., Bykov A.S., Svitich O.A., Zverev V.V., 20222022Пашков Е.А., Коротышева М.О., Пак А.В., Файзулоев Е.Б., Сидоров А.В., Поддубиков А.В., Быстрицкая Е.П., Дронина Ю.Е., Солнцева В.К., Зайцева Т.А., Пашков Е.П., Быков А.С., Свитич О.А., Зверев В.В.Pashkov E.A., Korotysheva M.O., Pak A.V., Faizuloev E.B., Sidorov A.V., Poddubikov A.V., Bystritskaya E.P., Dronina Y.E., Solntseva V.K., Zaiceva T.A., Pashkov E.P., Bykov A.S., Svitich O.A., Zverev V.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.finechem-mirea.ru/jour/article/view/1822Objectives

Objectives. Evaluation of changes in the viral activity of influenza A/WSN/33 after complex knockdown of combinations of cellular genes FLT4, Nup98 and Nup205 in human lung cell culture A549.

Methods

Methods. The work was carried out using the equipment of the Center for Collective Use of the I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, Russia. The authors performed transfection of combinations of small interfering ribonucleic acid (siRNA) complexes that cause simultaneous disruption of the expression of cellular genes FLT4, Nup98, and Nup205. Within three days from the moment of transfection and infection, the supernatant fluid and cell lysate were taken for subsequent viral reproduction intensity determination using the titration method for cytopathic action. The dynamics of changes in the concentration of viral ribonucleic acid (vRNA) was determined by real-time reverse transcription polymerase chain reaction (real-time RT-PCR). The nonparametric Mann–Whitney test was used to calculate statistically significant differences between groups.

Results

Results. Using all of the combinations of siRNA complexes, cell viability did not decrease below the threshold level of 70%. In cells treated with complex FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205 at the multiplicity of infection (MOI) equal to 0.1, a significant decrease in viral reproduction by 1.5 lg was noted on the first day in relation to nonspecific and viral controls. The use of siRNA complexes at MOI 0.01 resulted in a more pronounced antiviral effect. The viral titer in cells treated with siRNA complexes FLT4.2 + Nup98.1 and Nup98.1 + Nup205 decreased by 1.5 lg on the first day. In cells treated with complexes FLT4.2 + Nup205 and FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205, it decreased by 1.8 and 2.0 lg on the first day and by 1.8 and 2.5 lg on the second day, respectively, in relation to nonspecific and viral controls. When conducting real-time RT-PCR, a significant decrease in the concentration of vRNA was noted. At MOI 0.1, a 295, 55, and 63-fold decrease in the viral load was observed with the use of siRNA complexes FLT4.2 + Nup98.1, Nup98.1 + Nup205, and FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205, respectively. On the second day, a decrease in vRNA was also observed in cells treated with complex A. A 415-fold decrease in vRNA on the third day was noted in cells treated with complex FLT4.2 + Nup205. At MOI 0.01, the concentration of vRNA decreased 9.5 times when using complex B relative to nonspecific and viral control.

Conclusions

Conclusions. The study showed a pronounced antiviral effect of siRNA combinations while simultaneously suppressing the activity of cellular genes (FLT4, Nup98, and Nup205), whose expression products are playing important role in the viral reproduction process, and obtained original designs of siRNA complexes. The results obtained are of great importance for the creation of emergence prophylactic and therapeutic drugs, whose action is based on the mechanism of RNA interference.

Цели

Цели. Оценка изменения вирусной активности гриппа A/WSN/33 после комплексного нокдауна комбинаций клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 в культуре легочных кле­ток человека А549.

Методы

Методы. Работа выполнена с использованием оборудования центра коллективного поль­зования Научно-исследовательского института вакцин и сывороток им И.И. Мечникова (Россия). Авторами выполнялась трансфекция комбинаций комплексов миРНК, вызыва­ющих одновременное нарушение экспрессии клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205. В течение трех дней с момента трансфекции и заражения проводился отбор надосадоч­ной жидкости и клеточного лизата для последующего определения интенсивности ви­русной репродукции по методу титрования по цитопатическому действию. Динамику изменения концентрации вирусной рибонуклеиновой кислоты (вРНК) определяли мето­дом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального вре­мени (ОТ-ПЦР-РВ). Для вычисления статистически значимых различий между группами использовали непараметрический критерий Манна-Уитни.

Результаты

Результаты. При использовании всех комбинаций комплексов малых интерферирую­щих РНК (миРНК) жизнеспособность клеток не снижалась ниже порогового уровня в 70%. В клетках, обработанных комплексом FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205 при множественности заражения (Multiplicity of infection, MOI) 0.1 достоверное снижение вирусной репродукции на 1.5 lg отмечалось на первые сутки по отношению к неспецифическому и вирусному контролям. Использование комплексов миРНК при MOI 0.01 приводило к более выражен­ному противовирусному эффекту. Вирусный титр в клетках, обработанных комплек­сами миРНК FLT4.2 + Nup98.1 и Nup98.1 + Nup205 снижался на первые сутки на 1.5 lg. В клетках, обработанных комплексами FLT4.2 + Nup205 и FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205 снижался на 1.8 и 2 lg на первые сутки и на 1.8 и 2.5 lg на вторые сутки соответствен­но по отношению к неспецифическому и вирусному контролям. При проведении ОТ-ПЦР-РВ отмечено достоверное снижение концентрации вирусной РНК. При MOI 0.1 снижение ви­русной в 295, 55 и 63 раза отмечался при использовании комплексов миРНК FLT4.2 + Nup98.1, Nup98.1 + Nup205 и FLT4.2 + Nup98.1 + Nup205 соответственно. На вторые сутки сниже­ние вирусной РНК также отмечалось в клетках, обработанных комплексом FLT4.2 + Nup98.1. Снижение вРНК на третьи сутки в 415 раз отмечалось в клетках, обработанных ком­плексом FLT4.2 + Nup205. При MOI 0.01 концентрация вРНК снизилась в 9.5 раз при ис­пользовании комплекса Nup98.1 + Nup205 относительно неспецифического и вирусного контроля.

Выводы

Выводы. В ходе исследования был показан выраженный противовирусный эффект ком­бинаций миРНК при одновременном подавлении активности клеточных генов (FLT4, Nup98 и Nup205), чьи продукты экспрессии играют важное участие в процессе вирусной репродукции, а также получены оригинальные конструкции комплексов миРНК. Полу­ченные результаты имеют важное значение для создания препаратов для экстренной профилактики и терапии, чье действие основано на механизме РНК-интерференции.

РНК-интерференциявирус гриппа Аэкспрессия геновматричная РНКмалые интерферирующие РНКвирусная РНКRNA interferenceinfluenza A virusgene expressionmRNAsmall interfering RNAviral RNAАвторы выражают благодарность центру коллективного пользования НИИВС им И.И. Мечникова.The authors are grateful to the Center for Collective Use of the I.I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera.ReferencesPeteranderl C., Herold S., Schmoldt C. Human Influenza Virus Infections. Semin. Respir. Crit. Care Med. 2016;37(4):487–500. https://doi.org/10.1055/s-0036-1584801Peteranderl C., Herold S., Schmoldt C. Human Influenza Virus Infections. Semin. Respir. Crit. Care Med. 2016;37(4):487–500. https://doi.org/10.1055/s-0036-1584801Sellers S.A., Hagan R.S., Hayden F.G., Fischer W.A. 2nd. The hidden burden of influenza: A review of the extrapulmonary complications of influenza infection. Influenza Other Respir. Viruses. 2017;11(5):372–393. https://doi.org/10.1111/irv.12470Sellers S.A., Hagan R.S., Hayden F.G., Fischer W.A. 2nd. The hidden burden of influenza: A review of the extrapulmonary complications of influenza infection. Influenza Other Respir. Viruses. 2017;11(5):372–393. https://doi.org/10.1111/irv.12470Koehler P., Bassetti M., Kochanek M., Shimabukuro-Vornhagen A., Cornely O.A. Intensive care management of influenza-associated pulmonary aspergillosis. Clin. Microbiol. Infect. 2019;25(12):1501–1509. https://doi.org/10.1016/j.cmi.2019.04.031Koehler P., Bassetti M., Kochanek M., Shimabukuro-Vornhagen A., Cornely O.A. Intensive care management of influenza-associated pulmonary aspergillosis. Clin. Microbiol. Infect. 2019;25(12):1501–1509. https://doi.org/10.1016/j.cmi.2019.04.031Radzišauskienė D., Vitkauskaitė M., Žvinytė K., Mameniškienė R. Neurological complications of pandemic A(H1N1)2009pdm, postpandemic A(H1N1)v, and seasonal influenza A. Brain Behav. 2021;11(1):e01916. https://doi.org/10.1002/brb3.1916Radzišauskienė D., Vitkauskaitė M., Žvinytė K., Mameniškienė R. Neurological complications of pandemic A(H1N1)2009pdm, postpandemic A(H1N1)v, and seasonal influenza A. Brain Behav. 2021;11(1):e01916. https://doi.org/10.1002/brb3.1916Kalil A.C., Thomas P.G. Influenza virus-related critical illness: pathophysiology and epidemiology. Crit. Care. 2019;23(1):258. https://doi.org/10.1186/s13054-019-2539-xKalil A.C., Thomas P.G. Influenza virus-related critical illness: pathophysiology and epidemiology. Crit. Care. 2019;23(1):258. https://doi.org/10.1186/s13054-019-2539-xWebby R.J., Webster R.G. Emergence of influenza A viruses. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 2001;356(1416):1817–1828. https://doi.org/10.1098/rstb.2001.0997Webby R.J., Webster R.G. Emergence of influenza A viruses. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 2001;356(1416):1817–1828. https://doi.org/10.1098/rstb.2001.0997Kirby B.J., Symonds W.T., Kearney B.P., Mathias A.A. Pharmacokinetic, Pharmacodynamic, and Drug-Interaction Profile of the Hepatitis C Virus NS5B Polymerase Inhibitor Sofosbuvir. Clin. Pharmacokinet. 2015;54(7):677–690. https://doi.org/10.1007/s40262-015-0261-7Kirby B.J., Symonds W.T., Kearney B.P., Mathias A.A. Pharmacokinetic, Pharmacodynamic, and Drug-Interaction Profile of the Hepatitis C Virus NS5B Polymerase Inhibitor Sofosbuvir. Clin. Pharmacokinet. 2015;54(7):677–690. https://doi.org/10.1007/s40262-015-0261-7Gentile I., Buonomo A.R., Borgia G. Dasabuvir: A Non-Nucleoside Inhibitor of NS5B for the Treatment of Hepatitis C Virus Infection. Rev. Recent Clin. Trials. 2014;9(2):115–123. https://doi.org/10.2174/1574887109666140529222602Gentile I., Buonomo A.R., Borgia G. Dasabuvir: A Non-Nucleoside Inhibitor of NS5B for the Treatment of Hepatitis C Virus Infection. Rev. Recent Clin. Trials. 2014;9(2):115–123. https://doi.org/10.2174/1574887109666140529222602Magro P., Zanella I., Pescarolo M., Castelli F., Quiros-Roldan E. Lopinavir/ritonavir: Repurposing an old drug for HIV infection in COVID-19 treatment. Biomed. J. 2021;44(1):43–53. https://doi.org/10.1016/j.bj.2020.11.005Magro P., Zanella I., Pescarolo M., Castelli F., Quiros-Roldan E. Lopinavir/ritonavir: Repurposing an old drug for HIV infection in COVID-19 treatment. Biomed. J. 2021;44(1):43–53. https://doi.org/10.1016/j.bj.2020.11.005Han J., Perez J., Schafer A., Cheng H., Peet N., Rong L., Manicassamy B. Influenza Virus: Small Molecule Therapeutics and Mechanisms of Antiviral Resistance. Curr. Med. Chem. 2018;25(38):5115–5127. https://doi.org/10.2174/0929867324666170920165926Han J., Perez J., Schafer A., Cheng H., Peet N., Rong L., Manicassamy B. Influenza Virus: Small Molecule Therapeutics and Mechanisms of Antiviral Resistance. Curr. Med. Chem. 2018;25(38):5115–5127. https://doi.org/10.2174/0929867324666170920165926Castle S.C. Clinical relevance of age-related immune dysfunction. Clin. Infect. Dis. 2000;31(2):578–585. https://doi.org/10.1086/313947Castle S.C. Clinical relevance of age-related immune dysfunction. Clin. Infect. Dis. 2000;31(2):578–585. https://doi.org/10.1086/313947Looi Q.H., Foo J.B., Lim M.T., Le C.F., Show P.L. How far have we reached in development of effective influenza vaccine? Int. Rev. Immunol. 2018;37(5):266–276. https://doi.org/10.1080/08830185.2018.1500570Looi Q.H., Foo J.B., Lim M.T., Le C.F., Show P.L. How far have we reached in development of effective influenza vaccine? Int. Rev. Immunol. 2018;37(5):266–276. https://doi.org/10.1080/08830185.2018.1500570Pleguezuelos O., James E., Fernandez A., Lopes V., Rosas L.A., Cervantes-Medina A., Cleath J., Edwards K., Neitzey D., Gu W, Hunsberger S., Taubenberger J.K., Stoloff G., Memoli M.J. Efficacy of FLU-v, a broad-spectrum influenza vaccine, in a randomized phase IIb human influenza challenge study. npj Vaccines. 2020;5(1):22. https://doi.org/10.1038/s41541-020-0174-9Pleguezuelos O., James E., Fernandez A., Lopes V., Rosas L.A., Cervantes-Medina A., Cleath J., Edwards K., Neitzey D., Gu W, Hunsberger S., Taubenberger J.K., Stoloff G., Memoli M.J. Efficacy of FLU-v, a broad-spectrum influenza vaccine, in a randomized phase IIb human influenza challenge study. npj Vaccines. 2020;5(1):22. https://doi.org/10.1038/s41541-020-0174-9Wang F., Chen G., Zhao Y. Biomimetic nanoparticles as universal influenza vaccine. Smart Mater. Med. 2020;1:21–23. https://doi.org/10.1016/j.smaim.2020.03.001Wang F., Chen G., Zhao Y. Biomimetic nanoparticles as universal influenza vaccine. Smart Mater. Med. 2020;1:21–23. https://doi.org/10.1016/j.smaim.2020.03.001Smith M. Vaccine safety: medical contraindications, myths, and risk communication. Pediatr. Rev. 2015;36(6):227–238. https://doi.org/10.1542/pir.36.6.227Smith M. Vaccine safety: medical contraindications, myths, and risk communication. Pediatr. Rev. 2015;36(6):227–238. https://doi.org/10.1542/pir.36.6.227McManus M.T., Sharp P.A. Gene silencing in mammals by small interfering RNAs. Nat. Rev. Genet. 2002;3(10):737–747. https://doi.org/10.1038/nrg908McManus M.T., Sharp P.A. Gene silencing in mammals by small interfering RNAs. Nat. Rev. Genet. 2002;3(10):737–747. https://doi.org/10.1038/nrg908Пашков Е.А., Файзулоев Е.Б., Свитич О.А., Сергеев О.В., Зверев В.В. Перспектива создания специфических противогриппозных препаратов на основе синтетических малых интерферирующих РНК. Вопросы вирусологии. 2020;65(4):182–190. https://doi.org/10.36233/0507-4088-2020-65-4-182-190Pashkov E.A., Faizuloev E.B., Svitich O.A., Sergeev O.V., Zverev V.V. The potential of synthetic small interfering RNA-based antiviral drugs for influenza treatment. Voprosy Virusologii = Problems of Virology. 2020;65(4):182–190 (in Russ.). https://doi.org/10.36233/0507-4088-2020-65-4-182-190Adams D., Suhr O.B. Patisiran, an investigational RNAi therapeutic for patients with hereditary transthyretinmediated (hATTR) amyloidosis: Results from the phase 3 APOLLO study. Revue Neurologique. 2018;174(S1):S37. https://doi.org/10.1016/j.neurol.2018.01.085Adams D., Suhr O.B. Patisiran, an investigational RNAi therapeutic for patients with hereditary transthyretinmediated (hATTR) amyloidosis: Results from the phase 3 APOLLO study. Revue Neurologique. 2018;174(S1):S37. https://doi.org/10.1016/j.neurol.2018.01.085Zhao L., Wang X., Zhang X., Liu X., Zhang Y., Zhang S. Therapeutic strategies for acute intermittent porphyria. Intractable & Rare Diseases Research. 2020;9(4):205–216. https://doi.org/10.5582/irdr.2020.03089Zhao L., Wang X., Zhang X., Liu X., Zhang Y., Zhang S. Therapeutic strategies for acute intermittent porphyria. Intractable & Rare Diseases Research. 2020;9(4):205–216. https://doi.org/10.5582/irdr.2020.03089Van der Ree M.H., et al. Miravirsen dosing in chronic hepatitis C patients results in decreased microRNA-122 levels without affecting other microRNAs in plasma. Alimentary Pharmacology & Therapeutics. 2015;43(1):102–113. https://doi.org/10.1111/apt.13432Van der Ree M.H., et al. Miravirsen dosing in chronic hepatitis C patients results in decreased microRNA-122 levels without affecting other microRNAs in plasma. Alimentary Pharmacology & Therapeutics. 2015;43(1):102–113. https://doi.org/10.1111/apt.13432DeVincenzo J., et al. A randomized, double-blind, placebo-controlled study of an RNAi-based therapy directed against respiratory syncytial virus. Proceedings of the National Academy of Sciences (PNAS). 2010;107(19):8800–8805. https://doi.org/10.1073/pnas.0912186107DeVincenzo J., et al. A randomized, double-blind, placebo-controlled study of an RNAi-based therapy directed against respiratory syncytial virus. Proceedings of the National Academy of Sciences (PNAS). 2010;107(19):8800–8805. https://doi.org/10.1073/pnas.0912186107Qureshi A., Tantray V.G., Kirmani A.R., Ahangar A.G. A review on current status of antiviral siRNA. Rev. Med. Virol. 2018;28(4):1976. https://doi.org/10.1002/rmv.1976Qureshi A., Tantray V.G., Kirmani A.R., Ahangar A.G. A review on current status of antiviral siRNA. Rev. Med. Virol. 2018;28(4):1976. https://doi.org/10.1002/rmv.1976Lesch M., Luckner M., Meyer M., Weege F., Gravenstein I., Raftery M., Sieben C., Martin-Sancho L., Imai-Matsushima A., Welke R.W., Frise R., Barclay W., Schönrich G., Herrmann A., Meyer T.F., Karlas A. RNAi-based small molecule repositioning reveals clinically approved urea-based kinase inhibitors as broadly active antivirals. PLoS Pathog. 201918;15(3):e1007601. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1007601Lesch M., Luckner M., Meyer M., Weege F., Gravenstein I., Raftery M., Sieben C., Martin-Sancho L., Imai-Matsushima A., Welke R.W., Frise R., Barclay W., Schönrich G., Herrmann A., Meyer T.F., Karlas A. RNAi-based small molecule repositioning reveals clinically approved urea-based kinase inhibitors as broadly active antivirals. PLoS Pathog. 201918;15(3):e1007601. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1007601Пашков Е.А., Файзулоев Е.Б., Корчевая Е.Р., Ртищев А.А., Черепович Б.С., Сидоров А.В., Поддубиков А.В., Быстрицкая Е.П., Дронина Ю.Е., Быков А.С., Свитич О.А., Зверев В.В. Нокдаун клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 как супрессор вирусной активности гриппа А/WSN/33 (H1N1) в культуре клеток А549. Тонкие химические технологии. 2021;16(6):476–489. https://doi.org/10.32362/2410-6593-2021-16-6-476-489Pashkov E.A., Faizuloev E.B., Korchevaya E.R., Rtishchev A.A., Cherepovich B.S., Sidorov А.V., Poddubikov A.V., Bystritskaya Е.P., Dronina Yu.E., Bykov A.S., Svitich O.А., Zverev V.V. Knockdown of FLT4, Nup98, and Nup205 cellular genes as a suppressor for the viral activity of Influenza A/WSN/33 (H1N1) in A549 cell culture. Tonk. Khim. Tekhnol. = Fine Chem. Technol. 2021;16(6):476–489 (in Russ.). https://doi.org/10.32362/2410-6593-2021-16-6-476-489Пашков Е.А., Корчевая Е.Р., Файзулоев Е.Б., Пашков Е.П., Зайцева Т.А., Ртищев А.А., Поддубиков А.В., Свитич О.А., Зверев В.В., Создание модели изучения противовирусного действия малых интерферирующих РНК in vitro. Санитарный врач. 2022;1. https://doi.org/10.33920/med-08-2201-07Pashkov E.A., Korchevaya E.R., Faizuloev E.B., Pashkov E.P., Zvereva T.A. Rtishchev A.A., Poddubikov A.V., Svitich O.А., Zverev V.V. Creation of model for studying the antiviral effect of small interfering RNAs in vitro. Sanitarnyi vrach. 2022;1 (in Russ.). https://doi.org/10.33920/med-08-2201-07Lee H.K, Loh T.P., Lee C.K., Tang J.W., Chiu L., Koay E.S. A universal influenza A and B duplex real-time RT-PCR assay. J. Med. Virol. 2012;84(10):1646–1651. https://doi.org/10.1002/jmv.23375Lee H.K, Loh T.P., Lee C.K., Tang J.W., Chiu L., Koay E.S. A universal influenza A and B duplex real-time RT-PCR assay. J. Med. Virol. 2012;84(10):1646–1651. https://doi.org/10.1002/jmv.23375Ramakrishnan M.A. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World J. Virol. 2016;5(2):85–86. https://doi.org/10.5501/wjv.v5.i2.85Ramakrishnan M.A. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World J. Virol. 2016;5(2):85–86. https://doi.org/10.5501/wjv.v5.i2.85Estrin M.A., Hussein I.T.M., Puryear W.B., Kuan A.C., Artim S.C., Runstadler J.A. Host-directed combinatorial RNAi improves inhibition of diverse strains of influenza A virus in human respiratory epithelial cells. PLoS One. 2018;13(5):e0197246. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197246Estrin M.A., Hussein I.T.M., Puryear W.B., Kuan A.C., Artim S.C., Runstadler J.A. Host-directed combinatorial RNAi improves inhibition of diverse strains of influenza A virus in human respiratory epithelial cells. PLoS One. 2018;13(5):e0197246. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197246Piasecka J., Lenartowicz E., Soszynska-Jozwiak M., Szutkowska B., Kierzek R., Kierzek E. RNA Secondary Structure Motifs of the Influenza A Virus as Targets for siRNA-Mediated RNA Interference. Mol. Ther. Nucleic Acids. 2020;19:627–642. https://doi.org/10.1016/j.omtn.2019.12.018Piasecka J., Lenartowicz E., Soszynska-Jozwiak M., Szutkowska B., Kierzek R., Kierzek E. RNA Secondary Structure Motifs of the Influenza A Virus as Targets for siRNA-Mediated RNA Interference. Mol. Ther. Nucleic Acids. 2020;19:627–642. https://doi.org/10.1016/j.omtn.2019.12.018

The authors declare that there are no conflicts of interest present.