chemicallytechFine Chemical TechnologiesТонкие химические технологии2410-65932686-7575MIREA – Russian Technological University (RTU MIREA).10.32362/2410-6593-2021-16-6-476-489chemicallytech-1770Research ArticleBIOCHEMISTRY AND BIOTECHNOLOGYБИОХИМИЯ И БИОТЕХНОЛОГИЯKnockdown of FLT4, Nup98, and Nup205 cellular genes as a suppressor for the viral activity of Influenza A/WSN/33 (H1N1) in A549 cell cultureНокдаун клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 как супрессор вирусной активности гриппа А/WSN/33 (H1N1) в культуре клеток А549https://orcid.org/0000-0002-5682-4581ПашковЕ. А.PashkovE. A.

Пашков Евгений Алексеевич - аспирант, кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии, Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет); младший научный сотрудник, лаборатория молекулярной иммунологии, НИИВС им. И.И. Мечникова.

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2; 105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Evgeny A. Pashkov - Postgraduate Student, Department of Microbiology, Virology and Immunology, I.M. Sechenov FMSMU (Sechenov University); Junior Researcher, Laboratory of Molecular Immunology, FSBSI “I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera”

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991; 5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

pashckov.j@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7385-5083ФайзулоевЕ. Б.FaizuloevE. B.

Файзулоев Евгений Бахтиёрович - кандидат биологических наук, заведующий лабораторией молекулярной вирусологии.

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Evgeny B. Faizuloev - Cand. Sci. (Biol.), Head of the Laboratory of Molecular Virology.

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

faizuloev@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6417-3301КорчеваяЕ. Р.KorchevayaE. R.

Корчевая Екатерина Романовна - младший научный сотрудник, лаборатория молекулярной вирусологии.

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Ekaterina R. Korchevaya - Junior Researcher, Laboratory of Molecular Virology.

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

c.korchevaya@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-4212-5093РтищевА. А.RtishchevA. A.

Ртищев Артём Андреевич - младший научный сотрудник, лаборатория РНК-содержащих вирусов.

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Artem A. Rtishchev - Junior Researcher, Laboratory of RNA viruses.

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

rtishchevartyom@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-5803-6263ЧереповичБ. С.CherepovichB. S.

Черепович Богдан Сергеевич - младший научный сотрудник, лаборатория РНК-содержащих вирусов.

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Bogdan S. Cherepovich - Junior Researcher, Laboratory of RNA viruses.

5А, Malyi Kazennyy pereulok, Moscow, 105064

bogdancherepovich@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8962-4765СидоровА. В.SidorovА. V.

Сидоров Александр Викторович - кандидат биологических наук, заведующий лабораторией ДНК-содержащих вирусов.

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Alexander V. Sidorov - Cand. Sci. (Biol.), Head of the Laboratory of DNA viruses.

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

sashasidorov@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8962-4765ПоддубиковА. В.PoddubikovA. V.

Поддубиков Александр Владимирович - кандидат биологических наук, заведующий лабораторией микробиологии условно-патогенных бактерий.

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Alexander A. Poddubikov - Cand. Sci. (Biol.), Head of the Laboratory of Microbiology of Opportunistic Pathogenic Bacteria.

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

poddubikov@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8430-1975БыстрицкаяЕ. П.BystritskayaЕ. P.

Быстрицкая Елизавета Петровна - младший научный сотрудник, лаборатория молекулярной вирусологии.

105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Elizaveta P. Bystritskaya - Junior Researcher, Laboratory of Molecular Immunology.

5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

lisabystritskaya@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-6269-2108ДронинаЮ. Е.DroninaYu. E.

Дронина Юлия Евгеньевна - кандидат медицинских наук, доцент кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии, Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет; старший научный сотрудник, лаборатория легионеллеза, НИЦЭМ им. почетного академика Н.Ф. Гамалеи.

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2; 123098, Москва, ул. Гамалеи, д. 18

Yuliya E. Dronina - Cand. Sci. (Med.), Associate Professor, Department of Microbiology, Virology and Immunology, I.M. Sechenov FMSMU (Sechenov University); Senior Researcher, Laboratory of Legionellosis, N.F. Gamaleya NRC EM (The Gamaleya National Center).

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991; 18, Gamaleya ul., Moscow, 123098

droninayu@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8099-6201БыковА. С.BykovA. S.

Быков Анатолий Сергеевич - доктор медицинских наук, профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии.

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2

Anatoly S. Bykov - Dr. Sci. (Med.), Professor, Department of Virology and Immunology.

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991

9153183256@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1757-8389СвитичО. А.SvitichO. А.

Свитич Оксана Анатольевна - чл.-корр. РАН, доктор медицинских наук, директор, заведующий лабораторией молекулярной иммунологии, НИИВС им. И.И. Мечникова; профессор кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии, Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет).

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2; 105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Oxana A. Svitich - Corresponding Member of the Russian Academy of Sciences, Dr. Sci. (Med.), Head FSBSI “I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera,” Head of the Laboratory of Molecular Immunology, FSBSI “I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera”; Professor, Department of Microbiolody, Virology and Immunology, I.M. Sechenov FMSMU (Sechenov University).

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991; 5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

svitichoa@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0017-1892ЗверевВ. В.ZverevV. V.

Зверев Виталий Васильевич, академик РАН, доктор биологических наук, научный руководитель НИИВС им. И.И. Мечникова; заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии и иммунологии, Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет).

119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, с. 2; 105064, Москва, Малый Казенный переулок, д. 5А

Vitaliy V. Zverev - Full Member of the Russian Academy of Sciences, Dr. Sci. (Biol.), Scientific Director FSBSI “I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera”; Head of the Department of Microbiolody, Virology and Immunology, I.M. Sechenov FMSMU (Sechenov University).

8, Trubetskaya ul., Moscow, 119991; 5А, Malyi Kazennyi pereulok, Moscow, 105064

vitalyzverev@outlook.comПервый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет); Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова Минздрава РоссииРоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University); I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and SeraRussian FederationНаучно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова Минздрава РоссииРоссияI. Mechnikov Research Institute of Vaccines and SeraRussian FederationПервый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет); Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. почетного академика Н.Ф. Гамалеи Минздрава РоссииРоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University); N.F. Gamaleya National Research Center for Epidemiology and MicrobiologyRussian FederationПервый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)РоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University)Russian Federation202127012022166476489Copyright © Pashkov E.A., Faizuloev E.B., Korchevaya E.R., Rtishchev A.A., Cherepovich B.S., Sidorov А.V., Poddubikov A.V., Bystritskaya Е.P., Dronina Y.E., Bykov A.S., Svitich O.А., Zverev V.V., 20222022Пашков Е.А., Файзулоев Е.Б., Корчевая Е.Р., Ртищев А.А., Черепович Б.С., Сидоров А.В., Поддубиков А.В., Быстрицкая Е.П., Дронина Ю.Е., Быков А.С., Свитич О.А., Зверев В.В.Pashkov E.A., Faizuloev E.B., Korchevaya E.R., Rtishchev A.A., Cherepovich B.S., Sidorov А.V., Poddubikov A.V., Bystritskaya Е.P., Dronina Y.E., Bykov A.S., Svitich O.А., Zverev V.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.finechem-mirea.ru/jour/article/view/1770Objectives

Objectives. To evaluate the effect of cellular genes FLT4, Nup98, and Nup205 on the reproduction of the influenza A virus in A549 human lung cancer cell line.

Methods

Methods. The work was carried out using the equipment of the center for collective use of the I.I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera (Russia). The virus-containing fluid was collected within three days from the moment of transfection and infection and the intensity of viral reproduction was assessed by viral titration and hemagglutination reaction. The viral RNA concentration was determined by real-time reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). To calculate statistically significant differences between groups, the nonparametric Mann–Whitney test was used.

Results

Results. In cells treated with small interfering RNAs (siRNAs) targeted at FLT4, Nup98, and Nup205 genes, a significant decrease in their expression and indicators of viral reproduction (virus titer, hemagglutinating activity, viral RNA concentration) was observed at a multiplicity of infection (MOI) = 0.1. Additionally, it was found that a decrease in the expression of target genes using siRNA does not lead to a significant decrease in cell survival. The viral titer in cells treated with siRNA FLT4.2, Nup98.1, and Nup205 on the first day was lower by an average of 1.0 lg, and on the second and third days, by 2.2–2.3 lg, compared to cells treated with nonspecific siRNA. During real-time RT-PCR, a significant decrease in the concentration of viral RNA was observed with siRNA Nup98.1 (up to 190 times) and Nup205 (up to 30 times) on the first day, 26 and 29 times on the second day, and 6 and 30 times on the third day, respectively. For FLT4.2 siRNA, the number of viral RNA copies decreased by 23, 18, and 16 times on the first, second, and third days. Similar results were obtained when determining the hemagglutinating activity of the virus. The hemagglutinating activity on the third day most strongly decreased in cells treated with siRNA Nup205 and FLT4.2 (16 times). In cells treated with siRNA FLT4.1, Nup98.1, and Nup98.2, hemagglutinating activity decreased by 8 times.

Conclusions

Conclusions. In the present study, three cellular genes (FLT4, Nup98, and Nup205) were identified—the decrease in the expression of which effectively suppresses viral reproduction— and the original siRNA sequences were obtained. The results obtained are important for creating therapeutic and prophylactic medication, whose action is based on the RNA interference mechanism.

Цели

Цели. Оценка влияния подавления экспрессии клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 на динамику репродукции вируса гриппа А в культуре легочных клеток человека А549.

Методы

Методы. Работа выполнена с использованием оборудования центра коллективного пользования Научно-исследовательского института вакцин и сывороток им И.И. Мечникова (Россия). Вируссодержащую жидкость отбирали в течение трех дней с момента трансфекции и заражения и оценивали интенсивность вирусной репродукции методами титрования по цитопатическому действию и в реакции гемагглютинации. Концентрацию вирусной РНК определяли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР-РВ). Для вычисления статистически значимых различий между группами использовали непараметрический критерий Манна–Уитни.

Результаты

Результаты. В клетках, обработанных малыми интерферирующими РНК (миРНК) к генам FLT4, Nup98 и Nup205, отмечалось достоверное подавление экспрессии целевых генов и показателей вирусной репродукции (титр вируса, гемагглютинирующая активность, концентрация вирусной РНК) при коэффициенте множественности заражения, равном 0.1. Дополнительно было установлено, что подавление экспрессии целевых генов с помощью миРНК не приводит к значительному снижению выживаемости клеток. Вирусный титр в клетках, обработанных миРНК FLT4.2, Nup98.1 и Nup205, на первые сутки был меньше в среднем на 1.0 lg, а на вторые и третьи – на 2.2–2.3 lg, по сравнению с клетками, обработанными неспецифической миРНК. При проведении ОТ-ПЦР-РВ отмечено достоверное уменьшение концентрации вирусной РНК с миРНК Nup98.1 (до 190 раз) и Nup205 (до 30 раз) на первые сутки, в 26 и в 29 раз на вторые и в 6 и 30 раз на третьи сутки, соответственно. Для миРНК FLT4.2 количество копий вирусной РНК уменьшилось в 23, 18 и 16 раз на первые, вторые и третьи сутки. Схожие результаты были получены при определении гемагглютинирующей активности вируса. Наиболее сильно, в 16 раз, гемагглютинирующая активность на третьи сутки снизилась в клетках, обработанных миРНК Nup205 и FLT4.2. В клетках, обработанных миРНК FLT4.1, Nup98.1 и Nup98.2, гемагглютинирующая активность уменьшилась в 8 раз.

Выводы

Выводы. В ходе исследования были выявлены три клеточных гена (FLT4, Nup98 и Nup205), подавление экспрессии которых позволяет эффективно уменьшить вирусную репродукцию, а также получены оригинальные последовательности миРНК. Полученные результаты имеют важное значение для создания терапевтических и профилактических препаратов, чье действие основано на механизме РНК-интерференции.

вирус гриппа АРНК-интерференциягенматричная РНКмалые интерферирующие РНКInfluenza A virusRNA interferencegenemessenger RNAsmall interfering RNAsАвторы выражают благодарность центру коллективного пользования НИИВС им И.И. Мечникова. Исследование не имело спонсорской поддержкиThe authors are grateful to the Center for Shared Use of the I.I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and SeraReferencesHussain M., Galvin H.D., Haw T.Y., Nutsford A.N., Husain M. Drug resistance in influenza A virus: the epidemiology and management. Infect. Drug Resist. 2017 Apr 20;10:121–134. https://doi.org/10.2147/IDR.S105473. Hussain M., Galvin H.D., Haw T.Y., Nutsford A.N., Husain M. Drug resistance in influenza A virus: the epidemiology and management. Infect. Drug Resist. 2017 Apr 20;10:121–134. https://doi.org/10.2147/IDR.S105473Peasah S.K., Azziz-Baumgartner E., Breese J, Meltzer M.I., Widdowson MA. Influenza cost and cost-effectiveness studies globally – a review. Vaccine. 2013;31(46):5339–5348. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2013.09.013Peasah S.K., Azziz-Baumgartner E., Breese J, Meltzer M.I., Widdowson MA. Influenza cost and cost-effectiveness studies globally – a review. Vaccine. 2013;31(46):5339–5348. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2013.09.013Rezkalla S.H., Kloner R.A. Influenza-related viral myocarditis. WMJ. 2010;109(4):209–213. PMID: 20945722. URL: https://wmjonline.org/wp-content/uploads/2010/109/4/209.pdfRezkalla S.H., Kloner R.A. Influenza-related viral myocarditis. WMJ. 2010;109(4):209–213. PMID: 20945722. URL: https://wmjonline.org/wp-content/uploads/2010/109/4/209.pdfNguyen J.L., Yang W., Ito K., Matte T.D., Shaman J., Kinney P.L. Seasonal Influenza Infections and Cardiovascular Disease Mortality. JAMA Cardiol. 2016;1(3):274–281. PMID: 27438105; PMCID: PMC5158013 https://doi.org/10.1001/jamacardio.2016.0433Nguyen J.L., Yang W., Ito K., Matte T.D., Shaman J., Kinney P.L. Seasonal Influenza Infections and Cardiovascular Disease Mortality. JAMA Cardiol. 2016;1(3):274–281. PMID: 27438105; PMCID: PMC5158013 https://doi.org/10.1001/jamacardio.2016.0433Ekstrand J.J. Neurologic complications of influenza. Semin. Pediatr. Neurol. 2012;19(3):96–100. https://doi.org/10.1016/j.spen.2012.02.004Ekstrand J.J. Neurologic complications of influenza. Semin. Pediatr. Neurol. 2012;19(3):96–100. https://doi.org/10.1016/j.spen.2012.02.004Edet A., Ku K., Guzman I., Dargham H.A. Acute Influenza Encephalitis/Encephalopathy Associated with Influenza A in an Incompetent Adult. Case Rep. Crit. Care. 2020;2020:6616805. https://doi.org/10.1155/2020/6616805Edet A., Ku K., Guzman I., Dargham H.A. Acute Influenza Encephalitis/Encephalopathy Associated with Influenza A in an Incompetent Adult. Case Rep. Crit. Care. 2020;2020:6616805. https://doi.org/10.1155/2020/6616805Err H., Wiwanitkit V. Emerging H6N1 influenza infection: renal problem to be studied. Ren. Fail. 2014;36(4):662. https://doi.org/10.3109/0886022X.2014.883934Err H., Wiwanitkit V. Emerging H6N1 influenza infection: renal problem to be studied. Ren. Fail. 2014;36(4):662. https://doi.org/10.3109/0886022X.2014.883934Ленева И.А., Егоров А.Ю., Фалынскова И.Н., Махмудова Н.Р., Карташова Н.П., Глубокова Е.А., Вартанова Н.О., Поддубиков А.В. Индукция вторичной бактериальной пневмонии у мышей при заражении пандемическим и лабораторным штаммами вируса гриппа H1N1. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2019;(1):68–74. https://doi.org/10.36233/0372-9311-2019-1-68-74Leneva I.А., Egorov A.Yu., Falynskova I.N., Маkhmudоvа N.R., Kartashova N.P., Glubokova E.A., Vartanova N.O., Poddubikov A.V. Induction of secondary bacterial pneumonia in mice infected with pandemic and laboratory strains of the H1N1 influenza virus. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii = Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2019;(1):68–74 (in Russ.). https://doi.org/10.36233/03729311-2019-1-68-74Metersky M.L., Masterton R.G., Lode H., File T.M. Jr., Babinchak T. Epidemiology, microbiology, and treatment considerations for bacterial pneumonia complicating influenza. Int. J. Infect. Dis. 2012;16(5):e321–31. https://doi.org/10.1016/j.ijid.2012.01.003Metersky M.L., Masterton R.G., Lode H., File T.M. Jr., Babinchak T. Epidemiology, microbiology, and treatment considerations for bacterial pneumonia complicating influenza. Int. J. Infect. Dis. 2012;16(5):e321–31. https://doi.org/10.1016/j.ijid.2012.01.003Vanderbeke L., Spriet I., Breynaert C., Rijnders B.J.A., Verweij P.E., Wauters J. Invasive pulmonary aspergillosis complicating severe influenza: epidemiology, diagnosis and treatment. Curr. Opin. Infect. Dis. 2018;31(6):471–480. https://doi.org/10.1097/QCO.0000000000000504Vanderbeke L., Spriet I., Breynaert C., Rijnders B.J.A., Verweij P.E., Wauters J. Invasive pulmonary aspergillosis complicating severe influenza: epidemiology, diagnosis and treatment. Curr. Opin. Infect. Dis. 2018;31(6):471–480. https://doi.org/10.1097/QCO.0000000000000504Van der Vries E., Schutten M., Fraaij P., Boucher C., Osterhaus A. Influenza virus resistance to antiviral therapy. Adv. Pharmacol. 2013;67:217–246. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-405880-4.00006-8Van der Vries E., Schutten M., Fraaij P., Boucher C., Osterhaus A. Influenza virus resistance to antiviral therapy. Adv. Pharmacol. 2013;67:217–246. https://doi.org/10.1016/B978-0-12-405880-4.00006-8Han J., Perez J., Schafer A., Cheng H., Peet N., Rong L., Manicassamy B. Influenza Virus: Small Molecule Therapeutics and Mechanisms of Antiviral Resistance. Curr. Med. Chem. 2018;25(38):5115–5127. https://doi.org/10.2174/0929867324666170920165926Han J., Perez J., Schafer A., Cheng H., Peet N., Rong L., Manicassamy B. Influenza Virus: Small Molecule Therapeutics and Mechanisms of Antiviral Resistance. Curr. Med. Chem. 2018;25(38):5115–5127. https://doi.org/10.2174/0929867324666170920165926Looi Q.H., Foo J.B., Lim M.T., Le C.F., Show P.L. How far have we reached in development of effective influenza vaccine? Int. Rev. Immunol. 2018;37(5):266–276. https://doi.org/10.1080/08830185.2018.1500570Looi Q.H., Foo J.B., Lim M.T., Le C.F., Show P.L. How far have we reached in development of effective influenza vaccine? Int. Rev. Immunol. 2018;37(5):266–276. https://doi.org/10.1080/08830185.2018.1500570Pleguezuelos O., James E., Fernandez A., Lopes V., Rosas L.A., Cervantes-Medina A., Cleath J., Edwards K., Neitzey D., Gu W., Hunsberger S., Taubenberger J.K., Stoloff G., Memoli M.J. Efficacy of FLU-v, a broad-spectrum influenza vaccine, in a randomized phase IIb human influenza challenge study. NPJ Vaccines. 2020;5(1):22. https://doi.org/10.1038/s41541-020-0174-9Pleguezuelos O., James E., Fernandez A., Lopes V., Rosas L.A., Cervantes-Medina A., Cleath J., Edwards K., Neitzey D., Gu W., Hunsberger S., Taubenberger J.K., Stoloff G., Memoli M.J. Efficacy of FLU-v, a broad-spectrum influenza vaccine, in a randomized phase IIb human influenza challenge study. NPJ Vaccines. 2020;5(1):22. https://doi.org/10.1038/s41541-020-0174-9Wang F., Chen G., Zhao Y. Biomimetic nanoparticles as universal influenza vaccine. Smart Mater. Med. 2020;1:21–23. https://doi.org/10.1016/j.smaim.2020.03.001Wang F., Chen G., Zhao Y. Biomimetic nanoparticles as universal influenza vaccine. Smart Mater. Med. 2020;1:21–23. https://doi.org/10.1016/j.smaim.2020.03.001Smith M. Vaccine safety: medical contraindications, myths, and risk communication. Pediatr. Rev. 2015;36(6):227–238.Smith M. Vaccine safety: medical contraindications, myths, and risk communication. Pediatr. Rev. 2015;36(6):227–238.Wang J., Wu Y., Ma C., Fiorin G., Wang J., Pinto L.H., et al. Structure and inhibition of the drug-resistant S31N mutant of the M2 ion channel of influenza A virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2013;110(4):1315–1320. https://doi.org/10.1073/pnas.1216526110Wang J., Wu Y., Ma C., Fiorin G., Wang J., Pinto L.H., et al. Structure and inhibition of the drug-resistant S31N mutant of the M2 ion channel of influenza A virus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2013;110(4):1315–1320. https://doi.org/10.1073/pnas.1216526110Leneva I.A., Russell R.J., Boriskin Y.S., Hay A.J. Characteristics of arbidol-resistant mutants of influenza virus: Implications for the mechanism of anti-influenza action of arbidol. Antiviral Res. 2009;81(2):132–140. https://doi.org/10.1016/j.antiviral.2008.10.009Leneva I.A., Russell R.J., Boriskin Y.S., Hay A.J. Characteristics of arbidol-resistant mutants of influenza virus: Implications for the mechanism of anti-influenza action of arbidol. Antiviral Res. 2009;81(2):132–140. https://doi.org/10.1016/j.antiviral.2008.10.009Hurt A.C., Ernest J., Deng Y.M., Iannello P., Besselaar T.G., Birch C., et al. Emergence and spread of oseltamivirresistant influenza A (H1N1) viruses in Oceania, Southeast Asia and South Asia. Antiviral Res. 2009;83(1):90–93. https://doi.org/10.1016/j.antiviral.2009.03.003Hurt A.C., Ernest J., Deng Y.M., Iannello P., Besselaar T.G., Birch C., et al. Emergence and spread of oseltamivirresistant influenza A (H1N1) viruses in Oceania, Southeast Asia and South Asia. Antiviral Res. 2009;83(1):90–93. https://doi.org/10.1016/j.antiviral.2009.03.003Hurt A.C. The epidemiology and spread of drug resistant human influenza viruses. Curr. Opin. Virol. 2014;8:22–29. https://doi.org/10.1016/j.coviro.2014.04.009Hurt A.C. The epidemiology and spread of drug resistant human influenza viruses. Curr. Opin. Virol. 2014;8:22–29. https://doi.org/10.1016/j.coviro.2014.04.009Lampejo T. Influenza and antiviral resistance: an overview. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2020;39(7):1201–1208. https://doi.org/10.1007/s10096-020-03840-9Lampejo T. Influenza and antiviral resistance: an overview. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2020;39(7):1201–1208. https://doi.org/10.1007/s10096-020-03840-9Fire A.Z. Gene silencing by double-stranded RNA. Cell Death Differ. 2007;14(12):1998–2012. https://doi.org/10.1038/sj.cdd.4402253Fire A.Z. Gene silencing by double-stranded RNA. Cell Death Differ. 2007;14(12):1998–2012. https://doi.org/10.1038/sj.cdd.4402253Fire A., Xu S.Q., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mell C.C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 1998;391(6669): 806–811. https://doi.org/10.1038/35888Fire A., Xu S.Q., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mell C.C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 1998;391(6669): 806–811. https://doi.org/10.1038/35888Файзулоев Е.Б., Никонова А.А., Зверев В.В. Перспективы создания противовирусных препаратов на основе малых интерферирующих РНК. Вопросы вирусологии. 2013;(S1):155–169. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/perspektivy-sozdaniya-protivovirusnyh-preparatov-na-osnove-malyh-interferiruyuschih-rnkFaizuloev E.B., Nikonova A.A., Zverev V.V. Prospects for the development of antiviral drugs based on small interfering RNAs. Voprosy virusologii = Problems of Virology. 2013;(S1):155–169 (in Russ.). URL: https://cyberleninka.ru/article/n/perspektivy-sozdaniya-protivovirusnyh-preparatov-na-osnove-malyh-interferiruyuschih-rnkMcManus M.T., Sharp P.A. Gene silencing in mammals by small interfering RNAs. Nat. Rev. Genet. 2002;3(10):737–747. https://doi.org/10.1038/nrg908McManus M.T., Sharp P.A. Gene silencing in mammals by small interfering RNAs. Nat. Rev. Genet. 2002;3(10):737–747. https://doi.org/10.1038/nrg908Estrin M.A., Hussein I.T.M., Puryear W.B., Kuan A.C., Artim S.C., Runstadler J.A. Host-directed combinatorial RNAi improves inhibition of diverse strains of influenza A virus in human respiratory epithelial cells. PLoS One. 2018;13(5):e0197246. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197246Estrin M.A., Hussein I.T.M., Puryear W.B., Kuan A.C., Artim S.C., Runstadler J.A. Host-directed combinatorial RNAi improves inhibition of diverse strains of influenza A virus in human respiratory epithelial cells. PLoS One. 2018;13(5):e0197246. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0197246Janssen H.L., Reesink H.W., Lawitz E.J., Zeuzem S., Rodriguez-Torres M., Patel K., van der Meer A.J., Patick A.K., Chen A., Zhou Y., Persson R., King B.D., Kauppinen S., Levin A.A., Hodges M.R. Treatment of HCV infection by targeting microRNA. N. Engl. J. Med. 2013;368(18):1685–1394. https://doi.org/10.1056/nejmoa1209026Janssen H.L., Reesink H.W., Lawitz E.J., Zeuzem S., Rodriguez-Torres M., Patel K., van der Meer A.J., Patick A.K., Chen A., Zhou Y., Persson R., King B.D., Kauppinen S., Levin A.A., Hodges M.R. Treatment of HCV infection by targeting microRNA. N. Engl. J. Med. 2013;368(18):1685–1394. https://doi.org/10.1056/nejmoa1209026Qureshi A., Tantray V.G., Kirmani A.R., Ahangar A.G. A review on current status of antiviral siRNA. Rev. Med. Virol. 2018;28(4):e1976. https://doi.org/10.1002/rmv.1976Qureshi A., Tantray V.G., Kirmani A.R., Ahangar A.G. A review on current status of antiviral siRNA. Rev. Med. Virol. 2018;28(4):e1976. https://doi.org/10.1002/rmv.1976Hoy S.M. Patisiran: First Global Approval. Drugs. 2018;78(15):1625–1631. https://doi.org/10.1007/s40265-0180983-6Hoy S.M. Patisiran: First Global Approval. Drugs. 2018;78(15):1625–1631. https://doi.org/10.1007/s40265-0180983-6Lesch M., Luckner M., Meyer M., Weege F., Gravenstein I., Raftery M., Sieben C., Martin-Sancho L., ImaiMatsushima A., Welke R.W., Frise R., Barclay W., Schönrich G., Herrmann A., Meyer T.F, Karlas A. RNAi-based small molecule repositioning reveals clinically approved ureabased kinase inhibitors as broadly active antivirals. PLoS Pathog. 2019;15(3):e1007601. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1007601Lesch M., Luckner M., Meyer M., Weege F., Gravenstein I., Raftery M., Sieben C., Martin-Sancho L., ImaiMatsushima A., Welke R.W., Frise R., Barclay W., Schönrich G., Herrmann A., Meyer T.F, Karlas A. RNAi-based small molecule repositioning reveals clinically approved ureabased kinase inhibitors as broadly active antivirals. PLoS Pathog. 2019;15(3):e1007601. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1007601Karlas A., Machuy N., Shin Y., Pleissner K.P., Artarini A., Heuer D., et al. Genome-wide RNAi screen identifies human host factors crucial for influenza virus replication. Nature. 2010;463(7282):818–822. https://doi.org/10.1038/nature08760Karlas A., Machuy N., Shin Y., Pleissner K.P., Artarini A., Heuer D., et al. Genome-wide RNAi screen identifies human host factors crucial for influenza virus replication. Nature. 2010;463(7282):818–822. https://doi.org/10.1038/nature08760Arenas-Hernandez M., Vega-Sanchez R. Housekeeping gene expression stability in reproductive tissues after mitogen stimulation. BMC Res. Notes. 2013;6:285. https://doi.org/10.1186/1756-0500-6-285Arenas-Hernandez M., Vega-Sanchez R. Housekeeping gene expression stability in reproductive tissues after mitogen stimulation. BMC Res. Notes. 2013;6:285. https://doi.org/10.1186/1756-0500-6-285Lee H.K., Loh T.P., Lee C.K., Tang J.W., Chiu L., Koay E.S. A universal influenza A and B duplex real-time RTPCR assay. J. Med. Virol. 2012;84(10):1646–1651. https://doi.org/10.1002/jmv.23375Lee H.K., Loh T.P., Lee C.K., Tang J.W., Chiu L., Koay E.S. A universal influenza A and B duplex real-time RTPCR assay. J. Med. Virol. 2012;84(10):1646–1651. https://doi.org/10.1002/jmv.23375Ramakrishnan M.A. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World J. Virol. 2016;5(2):85–86. https://doi.org/10.5501/wjv.v5.i2.85Ramakrishnan M.A. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula. World J. Virol. 2016;5(2):85–86. https://doi.org/10.5501/wjv.v5.i2.85Eierhoff T., Hrincius E.R., Rescher U., Ludwig S., Ehrhardt C. The Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) promotes uptake of influenza А viruses (IAV) into host cells. PLoS Pathog. 2010;6(9):e1001099. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1001099Eierhoff T., Hrincius E.R., Rescher U., Ludwig S., Ehrhardt C. The Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) promotes uptake of influenza А viruses (IAV) into host cells. PLoS Pathog. 2010;6(9):e1001099. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1001099Shaw M.L., Stertz S. Role of Host Genes in Influenza Virus Replication. In: Tripp R., Tompkins S. (Eds.). Roles of Host Gene and Non-coding RNA Expression in Virus Infection. Current Topics in Microbiology and Immunology. 2017;419:151–189. https://doi.org/10.1007/82_2017_30Shaw M.L., Stertz S. Role of Host Genes in Influenza Virus Replication. In: Tripp R., Tompkins S. (Eds.). Roles of Host Gene and Non-coding RNA Expression in Virus Infection. Current Topics in Microbiology and Immunology. 2017;419:151–189. https://doi.org/10.1007/82_2017_30Watanabe T., Watanabe S., Kawaoka Y. Cellular networks involved in the influenza virus life cycle. Cell Host & Microbe. 2010;7(6):427–439. https://doi.org/10.1016/j.chom.2010.05.008Watanabe T., Watanabe S., Kawaoka Y. Cellular networks involved in the influenza virus life cycle. Cell Host & Microbe. 2010;7(6):427–439. https://doi.org/10.1016/j.chom.2010.05.008Hussain M., Galvin H.D., Haw T.Y., Nutsford A.N., Husain M. Drug resistance in influenza A virus: the epidemiology and management. Infect. Drug Resist. 2017;10:121–134. https://doi.org/10.2147/IDR.S105473Hussain M., Galvin H.D., Haw T.Y., Nutsford A.N., Husain M. Drug resistance in influenza A virus: the epidemiology and management. Infect. Drug Resist. 2017;10:121–134. https://doi.org/10.2147/IDR.S105473Sanjuán R., Domingo-Calap P. Mechanisms of viral mutation. Cell. Mol. Life Sci. 2016;73(23):4433–4448. https://doi.org/10.1007/s00018-016-2299-6Sanjuán R., Domingo-Calap P. Mechanisms of viral mutation. Cell. Mol. Life Sci. 2016;73(23):4433–4448. https://doi.org/10.1007/s00018-016-2299-6Presloid J.B., Novella I.S. RNA viruses and RNAi: quasispecies implications for viral escape. Viruses. 2015;7(6):3226–3240. https://doi.org/10.3390/v7062768Presloid J.B., Novella I.S. RNA viruses and RNAi: quasispecies implications for viral escape. Viruses. 2015;7(6):3226–3240. https://doi.org/10.3390/v7062768Das A.T., Brummelkamp T.R., Westerhout E.M., Vink M., Madiredjo M., Bernards R., et al. Human immunodeficiency virus type 1 escapes from RNA interferencemediated inhibition. J. Virol. 2004;78(5):2601–5. https://doi.org/10.1128/JVI.78.5.2601-2605.2004Das A.T., Brummelkamp T.R., Westerhout E.M., Vink M., Madiredjo M., Bernards R., et al. Human immunodeficiency virus type 1 escapes from RNA interferencemediated inhibition. J. Virol. 2004;78(5):2601–5. https://doi.org/10.1128/JVI.78.5.2601-2605.2004Rupp J.C., Locatelli M., Grieser A., Ramos A., Campbell P.J., Yi H., et al. Host cell copper transporters CTR1 and ATP7A are important for Influenza A virus replication. Virol J. 2017;14(1):11. https://doi.org/10.1186/s12985-0160671-7Rupp J.C., Locatelli M., Grieser A., Ramos A., Campbell P.J., Yi H., et al. Host cell copper transporters CTR1 and ATP7A are important for Influenza A virus replication. Virol J. 2017;14(1):11. https://doi.org/10.1186/s12985-0160671-7Wang R., Zhu Y., Zhao J., Ren C., Li P., Chen H., et al. Autophagy Promotes Replication of Influenza A Virus In Vitro. J. Virol. 2019;93(4):e01984–18. https://doi.org/10.1128/JVI.01984-18Wang R., Zhu Y., Zhao J., Ren C., Li P., Chen H., et al. Autophagy Promotes Replication of Influenza A Virus In Vitro. J. Virol. 2019;93(4):e01984–18. https://doi.org/10.1128/JVI.01984-18

The authors declare that there are no conflicts of interest present.